生物工程设备第四章液体培养基的制备及杀菌.ppt

第二节 液体培养基的制备及杀菌设备 3、加热器 它由三层直径不同的套管组成。内层和中层管上都钻有很多小孔，各层套管用法兰连接。 粉浆流过中层管，高压加热蒸汽从内外两层管的小孔内喷出，使热粉浆加热，这种形式汽液接触均匀，加热较全面，可在很短时间内使粉浆达到规定的蒸煮温度。 管式连续蒸煮流程 五器组合 糖化锅 现代过滤槽的基本结构 1－醪液进口 2－麦糟暂存箱 3－耕糟机 4－清洗环管 5－照明 6－人孔 7－排气管 8－调节阀 9－视镜 10－假底清洗管 11－过滤泵 12－耕糟机的升降和驱动装置 麦汁收集管（内区4个，外区6个） 不同形式的麦汁导出管结构 耕糟臂中心柱 耕 糟 臂 的 形 式 4、灭菌的方法 ①化学灭菌：高锰酸钾、漂白粉、双氧水、环氧乙烷、甲醛、75％酒精等； ②物理方法： 辐射灭菌： X射线、β射线、紫外线、超声波、微波等 干热灭菌法：常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。 过滤灭菌：微孔滤膜过滤除菌；大多用于热敏性物料 湿热灭菌： 121℃，保持20-30min ； 工厂中蒸汽容易获得，控制操作条件方便，采用蒸汽湿热灭菌是一种简单而又价廉、有效的灭菌方法。 5、湿热灭菌原理 蒸汽在冷凝时释放出大量潜能，并且具有强大穿透力，在高温和水存在时，微生物细胞中的蛋白质极易发生不可逆凝固性变性，致使微生物在短时间内死亡。 湿热灭菌的效果，取决与加热温度和受热时间。 该系统的主要设备是若干个薄板换热器和管式维持器。在该流程 中，培养基同时完成预热、灭菌和冷却过程。 低温培养基先在一个换热器中与从维持器中流出的灭菌后的热培养 基进行热交换，一方面使未灭菌的低温培养基得到预热，另一方面 使灭菌后的高温培养基得到预冷；预热后的培养基进入另一个换热 器被蒸汽加热到灭菌温度，再进入维持器进行保温灭菌；然后经预 冷后，又在另一个换热器中被冷却介质彻底冷却。 加热和冷却培养液所需的时间比使用喷射式连续灭菌稍长，但灭菌 周期则较间歇灭菌短得多。由于待灭菌培养液的预热过程同时为灭 菌培养液的冷却的过程，所以节约了加热蒸汽及冷却水的消耗。 6、培养基灭菌温度的选择 灭菌温度的选择应考虑的因素主要有： a.微生物的热致死温度：应高于该温度，通常以芽孢为准。 b.营养成分的破坏 灭菌温度的选择，应是在保证灭菌效果的前提下，尽可能减少培 养基中营养成分的破坏。 高温短时灭菌 培养基的热灭菌动力学 在一定温度下，活的微生物杂菌细胞（包括杂菌芽孢），受热死亡过程遵照分子反应速度理论，与一级化学反应中未反应分子的减少速度类似。杂菌是一个复杂的高分子体系，其受热死亡是因蛋白质高分子物质不活泼，结果导致蛋白质变性，这种反应同属于一级反应。 　　1．对数残留公式与理论灭菌时间 杂菌在一定温度下，受热死亡遵循一级反应方程的规律。 活菌的减少率 与有下列关系： ——活菌个数； ——受热时间； ——反应速度常数，（s-1），大小与微生物的种类和加热温度有关。 将上式积分： ——灭菌时间， ——灭菌开始时，污染的培养基中杂菌个数，mL； ——经灭菌时间后，残存活菌的个数，mL 得： 以上两式是分别以自然对数形式和常用对数形式表示的液体热灭菌的对数残留公式。 由上两式可得理论灭菌时间： 理论灭菌时间，是指特定灭菌温度下的灭菌时间，但实际生产中蒸汽加热灭菌的时间则以工厂的经验数据来确定，通常高温灭菌时间为15～30s，然后根据生产的类型再在维持罐内维持8～25。若要求培养基灭菌后绝对无菌，即 ，从上面公式可以看出，灭菌时间将等于无穷大，这当然是不可能的。根据实际情况，培养基灭菌后，以培养液中还残留一定的活菌数来计算。工程上，通常以 ，即杂菌污染降低到被处理的每1000罐中，只残留一个活菌。 　　2．灭菌温度与菌死亡的反应速度常数的关系 微生物的热死属于单分子反应，所以灭菌温度与菌死亡的反应速度常数的关系可用一级反应的公式——阿累尼乌斯方程表示： 取： 式中 ——菌死亡的速度常数，1/ ——阿累尼乌斯常数，1/； ——气体常数（1.987×4.187·）图2-13 菌死 亡速度常数 与温度的关系 ——热