腈水合酶在大肠杆菌中的表达与纯化.pdfVIP

／Y㈣1肿8删3删8伽3舢舢2f『『『5脚 摘 要 微生物产生的腈水合酶是催化丙烯腈生成丙烯酰胺的重要生物催化剂。它的 反应条件温和、产率高、副产物少、产物的自聚率低、具有区域和立体选择性， 可广泛地应用于氨基酸、酰胺、羧酸及其衍生物的合成。 本文通过PCR扩增得到诺卡氏菌的腈水合酶基因。先是构建了 相对分子质量较大，阻碍了腈水合酶的13亚基与a亚基的正确结合，从而使腈水 合酶表现不出酶活。利用凝血酶对纯化后的GST-NHase融合蛋白进行酶切，酶 4B亲和柱和苯甲脒柱结合分别去除酶切下的 切产物先后经GlutathioneSepharose GST蛋白和凝血酶，得到较纯的腈水合酶，气相色谱检测比酶活为100U／mg。 水合酶0【亚基基本上没有得到表达，影响了腈水合酶的活性。生物信息学分析发