五指山猪近交系EG细胞建系影响因素的研究.pdf

中文摘要 本实验以五指山小型猪(WZSP)近交系为实验材料，先后由18头妊娠母猪采集了200枚早 期胎儿，分别从不同饲养层、条件培养基、是否添加生长因子、传代过程中所用消化液等方面对 其EG细胞的建系影响因素进行了研究；并对传代获得的EG细胞集落进行了鉴定。 (1)从26～28d的新鲜猪胎儿可以获得大量的猪胎儿成纤维细胞(PEF)．经传代培养后即 可纯化。实验过程中，PEF传至10代以上，可以在体外长期培养并可冷冻保存。本实验对F5代 的PEF进行了核型分析，结果表明其在体外培养核型正常。 层；其余20枚采用未经丝裂霉素C处理的PEF与EG细胞共培养的方式进行培养。在使用同种 培养基的条件下，比较不同饲养层对猪的EG细胞分离培养与传代的影响。结果表明，STO细胞 适合用作猪EG细胞分离培养、传代的饲养层：而采用PEF与EG细胞共培养的方式只适于原代 PGCs的分离培养，传代后，仍需以STO细胞制备饲养层才能维持EG细胞的未分化状态，PEF 不能维持EG细胞的传代培养。 枚以高糖DMEM+15％FCS+2mmobml 基乙醇+lOOIU／ml青霉素+100u g／ml链霉素常规培养基进行培养，研究BRL条件培养基对猪EG 细胞培养与传代的影