广州管圆线虫感染小鼠脑组织cathepsins表达变化及其AcHTCP基因的克隆.pdfVIP

摘要 摘要 cantonensis)是由广州管圆线虫 广州管圆线虫病(Angiostrongyliasis cantonensis似c)引起的以中枢神经系统炎症为主的食源性寄生 Angiostrongylus 虫病。软体动物螺类，如非洲大蜗牛Achatina Pomacea 小鼠等是其非适宜宿主。人多因生食含有三期幼虫的淡水螺肉而感染。 广州管圆线虫病主要在东南亚和太平洋岛屿流行。自1945年台湾首例报道 之后，国内也陆续出现新发病例报道，而且在浙江和北京均出现大规模爆发流 行，我国卫生部于2003年将广州管圆线虫病列为新发传染病。目前，临床上广 州管圆线虫病主要诊断依据包括三个方面：接触史、临床症状和ELISA检测结 果。从感染患者脑脊液中检测到虫体是诊断此病的金标准，尽管此方法结果可 靠，但是检出率很低，而且是侵袭性检查，因此难以普及，临床上也少见使用。 实验室最常采用的诊断方法是ELISA法(检测患者血清特异性抗体)，但用于 ELISA法的抗原是虫体粗抗原，不但敏感性和特异性有待提高，也无法用于疗 效考核。因此，寻找具有诊断价值的生物标记物对于改进和完善广州管圆线虫 病的诊断方法具有重要意义。 从已有的研究中不难发现，在寄生虫感染宿主过程中，宿主和寄生虫的组 织蛋白酶均发挥重要作用。小鼠组织蛋白酶亚型众多，搜索Pubmed数据库可得 到18种组织蛋白酶亚型，即是：CathepsinA，B，C，D，E，F，GH，J，K，L，M，O，Q，R，S，w,z。 通过对有关宿主组织蛋白酶文献的分析，推测小鼠组织蛋白酶可能参与寄生虫 感染所致脑炎的过程。 从GenBank数据库中获得广州管圆线虫血红蛋白型半胱氨酸蛋白酶 cantonensis (Angiostrongylus GenBank号 hemoglobinase·typecysteineproteinase 码：HQll0101．1)基因序列。研究发现虫源性组织蛋白酶与寄生虫的宿主入侵、 自身保护和免疫逃避相关。 本研究分两个部分：①感染BALB／c小鼠脑部组织蛋白酶各亚型的表达谱 及变化规律研究；②广州管圆线虫血红蛋白型半胱氨酸蛋白酶基因的克隆。 II 摘要 第一部分感染小鼠脑部组织蛋白酶各亚型的表达谱及其变化 规律研究 研究目的 研究BALB／c小鼠Ac感染模型，动态观察感染BALB／c小鼠组织蛋白酶亚 型的表达谱及表达谱的变化。为进一步寻找到可作为诊断广州管圆线虫病的生 物标记物(biomarker)提供实验基础。 研究内容和方法 1．在GenBank中查找小鼠不同亚型组织蛋白酶家族基因序列信息。 蛋白酶1 时荧光定量PCR(Real．timePCR)引物。 3．建立感染广州管圆线虫病的BALB／c小鼠动物模型，收集感染不同时点 (7d、14d、21d)的脑组织，用Real．timePCR检测分析小鼠感染后各种亚型基 因的表达情况。 研究结果 A，B，C，D，E，F，GH，J，K，L，M，O，Q，R，S，w,z。 2．建立感染广州管圆线虫病BALB／c小鼠模型，通过对感染过程脑组织组 织蛋白酶各亚型的表达水平的检测，发现不同亚型组织蛋白酶表达呈现三种变 化趋势：逐步上升型(惑E、s、z)、陡然上升型(CathepsinG、K、L、M、Q、 J)。 R)及不规则变化型(Cathepsin 小结 本次研究结果表明，感染广州管圆线虫病后，BALB／c小鼠的组织蛋白酶各 亚型的表达水平发生变化，大多数组织蛋白酶亚型出现表达水平的升高。分析 结果提示，小鼠组织蛋白酶S、C和M型具有进一步的研究意义。 III 摘要 第二部分广州管圆线虫的血红蛋白型半胱氨酸蛋白酶基因的