植物乳杆菌STⅢ对肠上皮细胞的粘附性质及其机理研究.pdf

摘要 摘要 益生菌对胃肠道粘膜的粘附能力是发挥益生作用的前提条件，粘附的益生菌能够抑 制病原菌的入侵，调节消化道内菌群的平衡，因此粘附能力是益生菌筛选的重要标准之 一。研究益生菌的粘附性质及机理有助于阐明益生菌对胃肠道微环境的改善以及病原菌 有良好益生功能的乳酸菌为研究对象，以人肠上皮样细胞Caco．2为模型，筛选出粘附 性能较好的菌株，就其粘附性质、对致病菌粘附的抑制作用及相关机理进行初步的研究。 首先，选取具有良好粘附性能的LGG作为阳性对照，研究三株益生菌株的粘附性 能和表面性质，初步探讨与肠细胞的粘附机理。结果发现ST．III是所测试的四株菌中粘 附能力最强的。当加入细菌浓度为5．0x108 均每个Caco．2细胞上的粘附数为28．43CFU／细胞。在粘附与表面性质相关性实验中， 所测试的四株菌的粘附能力和疏水性具有很好的相关性，表明可能主要是疏水作用参与 了所测试菌株与Caco．2细胞的粘附。糖类抑制试验和酵母凝集试验表明ST．III菌体表面 分布着甘露糖特异性凝集素。选择粘附性能最好的ST．111作为研究对象，研究了动力学 因素和外在环境因素对其粘附效果的影响。结果发现ST．III对Caco一2细胞的粘附是多种 因素共同作用的结果，它们的主要作用方式是通过影响粘附素与受体的结合。以上结果 表明，ST—III对Caco．2细胞的粘附可能涉及到非特异性的疏水结合和甘露糖特异性粘附 两个过程，粘附素与受体的特异性结合占主导地位。 肠杆菌和肠炎沙门氏菌粘附Caco．2细胞的排除、竞争和替代作用，并通过检测细胞膜 的通透性分析益生菌对Caco-2细胞的保护作用。结果发现ST．III对致病菌粘附的抑制作 用存在量效关系。在三种作用方式中，ST-ⅡI对致病菌的排除作用最强，竞争作用其次， 而替代作用最弱，表明提前加入ST-III能更有效地减少致病菌的粘附和侵入；细胞膜通 透性结果表明ST．III在与致病菌共同作用于肠细胞时，能通过竞争性占位效应，使宿主 细胞免受损伤。 最后，通过化学和酶处理ST．III细胞壁表面成分、提取相关物质，对ST．III的粘附 素和对致病菌粘附的抑制机理进行了研究。结果表明ST．III菌体的表面蛋白参与了其与 kDa的三组蛋白；ST-III对大肠杆菌与 Caco．2细胞的粘附，其主要成分为分子量在21．70 Caco一2细胞粘附的抑制作用主要是由于其表面蛋白与Caco．2细胞上的甘露糖受体相结 合阻止了大肠杆菌的结合，而对沙门氏菌粘附的抑制作用主要是通过空间位阻形成的。 关键词：植物乳杆菌ST．III，粘附，粘附抑制，表面蛋白 Abstract Abstract Adhesiontothe mucosaisthe for toexert gastrointestinal prerequisiteprobioticstheir activitiesandtheadhered havebeen toinhibitthe health-·promoting probiotics proven entero·- and thebalanceof adhesiveis flora．Therefore，the pathogensadjust gastrointestinal ability consideredasoneofselectioncriteriafor strains．Studiesontheadhesive probiotic properties andmechanismsalecrucialbothforthe ofmicrobial