化浊解毒调肝方对肝纤维化大鼠TGFβⅡ型受体及其smad4蛋白表达的影响.pdf

摘 要 摘 要 目的：本实验通过无菌未灭活的猪血清腹腔注射的方法制备肝纤维化大鼠模型，探 讨化浊解毒调肝方抗大鼠肝纤维化的作用及其可能的机制，为肝纤维化的治疗提供理论 及实验依据。主要内容包括:观察化浊解毒调肝方对肝纤维化大鼠肝组织病理形态学的 影响；化浊解毒调肝方对肝纤维化大鼠肝组织 TGFβII 型受体（TβRII ）mRNA 表达的 影响；化浊解毒调肝方对肝纤维化大鼠肝组织 smad4 蛋白表达的影响。 方法：清洁级 Wistar 大鼠 50 只，雄性，体重 200-220g 。适应性喂养一周后随机抽 取 10 只作为正常组。造模成功后将剩余 40 只大鼠随机分为：模型对照组、秋水仙碱组 （简称西药治疗组）、化浊解毒调肝方高剂量组（HZG ）、化浊解毒调肝方低剂量组 (HZD)，每组 10 只。各组均普通颗粒饲料喂养，自由饮水和进食，分笼饲养于 20±2 ℃， 湿度 65%±5%清洁级动物实验室内。除正常对照组外，其余 40 只均采用未灭活的猪血 清腹腔注射，每次 0.5ml/只，固定时间为周一、周五上午 9 点，每周进行两次，连续 8 周。秋水仙碱治疗组和中药治疗组于造模的第 8 周末给药，化浊解毒调肝方低剂量组给 予含 1.5g/ml 生药水煎剂灌胃；化浊解毒调肝方高剂量组给予含 3.0g/ml 生药水煎剂灌 胃；秋水仙碱组给予0.154g/kg·d 灌胃，均至 12 周末。每天上午灌胃一次，每次 3ml， 连续 4 周。正常对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃。 于第 12 周末处死大鼠，留取大鼠肝组织，采用苏木精-伊红染色和 Masson 染色 （胶 原纤维特殊染色法）观察肝组织病理形态学的变化。采用 RT-PCR 技术测定肝组织 TGFβII 型 受 体 （ 以 下 简 称 TβRII ）mRNA 表 达 情 况 ， 采 用 免 疫 印 迹 法 (Western-immunoblotting) 测定大鼠肝组织中 smad4 蛋白的表达，所得数据经过整理， 数据用均数±标准差表示，采用 SPSS13.0 统计软件进行处理。两个样本均数比较采用 t 检验，多个样本均数比较行完全随机设计单因素方差分析。 结果： 1.一般情况：正常对照组大鼠食欲佳，被毛光滑，精神状态好，体重增加。模型组 大鼠精神萎靡，活动减少，食欲减退，消瘦，皮毛无光泽，体重较前有所下降，进食较 正常组少、尿黄，有的大鼠鼻有出血。西药治疗组及中药治疗各组大鼠精神、食欲及活 动介于正常组与模型组之间。 I 摘 要 2.化浊解毒调肝方对肝纤维化大鼠肝脏病理形态学的影响 肉眼观察，正常组大鼠肝脏质地软，颜色呈深红色，表面光滑，边缘锐圆。模型组 大鼠肝脏明显肿大，质地较硬，颜色片偏暗红，表面有结节形成而粗糙不平，有的可见 颗粒样凸起，边缘较纯。秋水仙碱组和中药治疗各组大鼠肝脏肝脏肿大不明显，表面比 较光滑，偶见沙粒样增生，颜色略见暗红，质地较脆。 光镜下观察，正常组肝小叶结构完整，肝细胞围绕中央静脉呈放射状的排列，肝细 胞核大而圆，无变性坏死，未见明显的纤维结缔组织增生。模型组可见肝小叶结构被严 重破坏，肝细胞广泛的脂肪变性、坏死并伴炎性细胞浸润，纤维组织大量增生，个别动 物可见假小叶形成。中药治疗各组和西药对照组肝组织病理的损伤程度与模型组相比均 可见有不同程度的修复，尤其是化浊解毒调肝方高剂量组，肝细胞脂肪变性及炎性细胞 浸润较模型组减少，胶原纤维增生较轻，主要散在于肝血窦和 disse 间隙、汇管区，无 假小叶形成。 3.化浊解毒调肝方对肝纤维化大鼠肝组织TβRIImRNA表达的影响 与正常对照组相比，模型对照组大鼠肝组织 TβRIImRNA 的表达明显增强(P0.01) ； 化浊解毒调肝方高剂量组、低剂量组及秋水仙碱组与模型组相比 TβRIImRNA 的表达均 有明显下降(P0.01) ；化浊解毒调肝方高剂量组与秋水仙碱组相比 TβRIImRNA 的表达 有显著性降低(P0.01) ；化浊解毒调肝方高剂量组与化浊解毒调肝方小剂量相比 TβRIImRNA 的表达有显著性降低(P0.01) ；化浊解毒调肝方小剂量组与秋水仙碱组相比 TβRIImRNA 的表达无明显差异（P0