人DC-SIGN转基因细胞的构建及其鼠抗人DC-SIGN单克隆抗体的研制.pdfVIP

人DC．SIGN转基因细胞的构建及鼠抗人DC．SIGN单克隆抗体的研制 中文摘要 中文摘要 树突状细胞(dendritic cells，APCs)，它具有强大的抗原处理和递呈能力。由于其分布广泛， presenting 可以第一时间发现并处理外来抗原并将其递呈至T细胞，诱导免疫应答或者免疫 耐受。DCs功能介导与其表面大量的免疫分子密切相关。 DC—SIGN属于II类C型凝集素，由胞内段、跨膜段和胞外段组成，分子量为 domain，CRD)， 44kDa。胞外段只有一个糖基识别序列(earbohydraterecognition dendritic (monocyte．derived DC．SIGN与抗原结合后可以介导抗原的内吞，并递呈至T淋巴细胞，诱导免疫应 论研究中具有重要的意义而且在临床应用中具有重要的价值。 本论文分为两个部分： 1．人DC．SIGN基因克隆及其转基因细胞的构建 并测序，通过脂质体转染技术将测序正确的重组逆转录病毒载体 基因转染细胞。 2．鼠抗人DC．SIGN单克隆抗体的研制及其鉴定 用B淋巴细胞杂交瘤技术，将免疫后小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进 行细胞融合，经HAT选择培养，以L929／DC—SIGN细胞株作为阳性筛选细胞株， 人DC．SIGN转基因细胞的构建及鼠抗人DC-SIGN单克隆抗体的研制． 中文摘要 对抗体分泌阳性孔内细胞的反复筛选并经多次的克隆化培养，最终获得l株持续、 稳定分泌鼠抗人DC．SIGN单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为4G8。杂交瘤细胞 株经体外连续传代(40代)培养，液氮冻存半年后复苏，仍生长良好，稳定分泌 抗体。 采用本室建立的腹水诱生方法生产单克隆抗体，腹水的产量平均为3．5ml／只小 鼠。经Protein G亲和层析柱分离纯化抗体，单克隆抗体纯化后蛋白含量在4mg／ml 之上，免疫荧光法分析表明，其效价在1：1000以上，抗体蛋白用于间接免疫荧 数目超过小鼠体细胞数目，表明杂交瘤4G8为融合体。 争抑制实验结果表明，单克隆抗体4G8与商品化抗体E021819识别不同的抗原表位。 的成熟表达水平有一定降低；外周血来源的单核细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞均 等肿瘤细胞株也均不表达DC．SIGN分子。 的诱导表达情况，结果显示，经PMA和IL-4联合刺激后THP一1细胞株上有 DC—SIGN分子的表达，并且在刺激48h后达到了较高水平，刺激72h后表达水平 细胞株可以作为单核细胞向DCs分化的模型。 关键词：DC．SIGN；DCs：单克隆抗体；基因转染 作 者：朱守兵 指导教师：王泳 张学光 II 人DC-SIGN转摹因细胞的构建及鼠抗人DC．SIGN单克隆抗体的研制 英文摘要 Constructionof humanDC—SIGN Cellsand transgenic ofanti—-human Preparation DC—-SIGNmonoclonal antibody Abstract Dendritic themost cells(DCs)areimportantantigenpresenting immune have