牛支原体硫辛酰胺脱氢酶的蛋白质组学筛选及功能鉴定.pdf

摘要 摘 要 牛支原体是感染牛的重要致病性病原体之一，可引起包括牛肺炎、乳腺炎、关节炎、角 膜结膜炎在内的多种疾病，且在牛场中较难被彻底消灭。我国自2008年首次报道牛支原体肺 炎至今，该病原已然成为危害我国养牛业的重要因素。目前国内外关于牛支原体的研究主要 集中在病原的免疫及核酸鉴别诊断方面，关于牛支原体蛋白的免疫原性及免疫保护性特征的 研究报道较少。 本研究利用双向电泳(2一DE)技术，完成了牛支原体单个蛋白的分离并结合免疫印迹技术 对其免疫相关蛋白进行了筛选，在本实验室2010年完成牛支原体湖北株的全基因组序列的测 定和注释的基础上，筛选出了LPDH。LPDH是一种黄素氧化还原酶，广泛存在于各种生物中， 并在能量代谢过程中起重要作用。目前，人们己经鉴定了多种生物的LPDH基因，但是还没 有与牛支原体LPDH相关的报道。 本研究利用原核表达系统得到了大小约为68KDa牛支原体LPDH的重组蛋白，并通过条 件优化将原本沉淀表达的蛋白呈现出部分上清表达，从而获取了最大程度类似于天然蛋白的 重组蛋白，纯化后的重组蛋白用彪bovis湖北分离株攻毒牛后获得的阳性血清进行Western blot分析，结果为阴性，但是Dotblot分析，结果为阳性，初步表明该重组蛋白具有免疫原 性