湖南农业大学生物化学-02-核酸的结构与功能-03_PDF转换成word转换器.docVIP

第三章 核酸的结构与功能  生物化学（第三版）辅导与 习题集（王镜岩《生物化学》 配套辅导） 戴余军 著 湖北辞书出版社 2010 - 06 当当价：￥20.80  第三章核酸的结构与功能 第一节核酸通论 第二节核酸基本构件单位—核苷酸 第三节 DNA的分子结构 第四节 RNA的分子结构 第五节核酸的某些理化性质 第六节核酸研究常用技术  第五节核酸的某些理化性质 一、核酸的水解 二、核酸的两性解离性质 三、核酸的紫外吸收（λmax=260nm） 四、核酸的变性、复性、增（减）色效应 五、核酸的熔解温度（Tm）  一、核酸的水解 核酸可被酸、碱或酶水解成为各种组分，其水解程度因水解条件而异，水 解产物可用层析、电泳等方法分离。 碱水解 ?RNA能被稀碱水解，在水解过程中，随着磷酸二酯键的断裂， 先生成2’,3’-环核苷酸中间物，最后生成2’-核苷酸和3’-核苷酸 的混合物。 ?DNA由于不存在2’-OH，对稀碱有一定抗性 酸水解 在酸性条件下，磷酸酯键比糖苷键更稳定，其中稳定性最差的 是嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷键。所以，若对核酸进行酸水解， 首先生成的是无嘌呤酸(apurinic acid）。  核酸酶是指所有可以水解核酸的酶。 ?依据底物不同分类 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase)： 专一降解DNA。 RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 专一降解RNA ?依据切割部位不同 。 核酸内切酶：分为限制性核酸内切酶和非特异 性限制性核酸内切酶。 核酸外切酶：5′→3′或3′→5′核酸外切酶。  RNase 实验室常用的RNase有两种，其一是牛胰核糖核 酸酶(pancreatic ribonuclease)，又称RNase I或RNase A，是一种专一性内切酶，水解产物为3-嘧啶核苷酸， 和以3-嘧啶核苷酸结尾的寡核苷酸。 其二是核糖核酸酶T1(ribonuclease T1)，水解产 物为3-鸟嘌呤核苷酸，和以3-鸟嘌呤核苷酸结尾的寡 核苷酸。  DNase 实验室常用的DNase有牛胰脱氧核糖核酸酶 (DNase I, pancreatic deoxyribonuclease)，可以将单链 或双链DNA水解为平均长度为4个核苷酸的，以5-磷酸 为末端的寡聚核苷酸。 牛脾脱氧核糖核酸酶(DNase II, spleen deoxyribonuclease)，可以将单链或双链DNA水解为平 均长度为6个核苷酸的，以3-磷酸为末端的寡聚核苷酸。  核酸的一般理化性质 1.核酸为两性电解质，通常表现为酸性。 2.DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末，不溶 于有机溶剂。 3.DNA溶液的粘度极高，而RNA溶液要小得多。 4.RNA能在室温条件下被稀碱水解而DNA对碱稳定。 5.沉降行为:不同构象的核酸分子的沉降的速率有 很大差异，这是超速离心法提取和纯化核酸的 理论基础。  二、核酸的酸碱性质 磷酸基的解离 胞嘧啶的解离  腺嘌呤核苷酸 pK2? = 3.7 核苷 含氮环 pK3 = 6.2 第二磷酸基 pK1? = 0.9 第一磷酸基 酸 的 解 离 曲 线 鸟嘌呤核苷酸 pK2? = 3.7 含氮环 离子pK1? = 0.7 第一磷酸基 pK3? = 6.1 第二磷酸基 烯醇式羟基 化 程度 pK2? = 4.3 含氮环 胞嘧啶核苷酸 pK3 = 6.3 第二磷酸基 pK1? = 0.8 第一磷酸基 尿嘧啶核苷酸 pK1? = 1.0 pK3? = 6.4 第一磷酸基 第二磷酸基 烯醇式羟基 pH  三、核酸分子具有强烈的紫外吸收 核酸在波长 260nm处有强烈的吸收，是 由碱基的共轭双键所决定的。这一特性常用作 核酸的定性和定量分析。  碱基的紫外吸收光谱  紫外吸收的应用 ?DNA或RNA的定量 A260= 1.0相当于 50μg/mL双链DNA(dsDNA) 40μg/mL单链DNA (ssDNA or RNA) 20μg/mL寡核苷酸 ?确定样品中核酸的纯度 分别测定蛋白和核酸在260和280的OD值： 纯的 DNA两者比值: A260/A280= 1.8 纯的RNA两者比值: A260/A280= 2.0  四、核酸的变性、复性 变性：在物理、化学因素影响下， DNA碱基对 间的氢键断裂，双螺旋解开，这是一个是跃变过程 ，伴有A260增加（增色效应）,DNA的功能丧失。 复性：在一定条件下，变性DNA 单链间碱基重 新配对恢复双螺旋结构，伴有A 260减小（减色效应） ,DNA的功能恢复。 变性（加热） 复性（缓慢冷却）  DNA解链时的紫外吸收变