肺炎支原体ORF6区基因的克隆和表达及其应用于血清学诊断的初步的研究.pdf

肺炎支原体ORF6 区基因的克隆与表达及应用于血清学 诊断的初步研究 摘 要 肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae ，MP）是引起气管支气管炎和原发性 非典型性肺炎的主要病原体，10％－30％的社区获得性肺炎是由MP 引起的。鉴 于MP 的生长缓慢且从临床样本中进行分离培养相当困难不适用于该病原体感染 的诊断,此外由于MP 缺乏细胞壁,用于治疗细菌感染的青霉素和β内酰胺类药物 对它无效。为了能够尽早地使用恰当的抗菌素进行治疗，用可靠而敏感的血清学 检测方法对MP 早期感染的临床诊断进行证实是必须的。研究表明，MP P90 粘附 相关蛋白具有很强的免疫原性，是MP 诊断和疫苗研究的重要候选抗原分子。 本研究采用 PCR 方法，从肺炎支原体 FH 株基因组中扩增了长为 1003bp 的 ORF6 区DNA 片段，用TA 克隆的方法克隆该片断，并以该重组质粒为模板，扩增 ORF6 区基因，此扩增产物经过双酶切后克隆到表达载体pET -32a(＋)中，转化 大肠杆菌 BL21(DE3)，经 IPTG 诱导表达后得重组蛋白 pro2174-3176。采用 SDS和Western blot