LXP增加小鼠肝胆汁酸的合成和DBP表达加强有关.pdfVIP

中 文 摘 要 LXR增加小鼠肝胆汁酸的合成与DBP 的表达加强有关 摘 要 目的 胆固醇转化成胆汁酸是维持胆固醇代谢平衡的重要途 径。胆固醇经胆固醇7。一轻化酶(CYP7A1)的作用生成 7a- Ts胆固醇，或通过胆固醇27-化酶(CYP27A)的作用生27- 轻胆固醇。7a一或27-轻胆固醇再经轻化、连接辅酶A生成三 轻 (或二轻)胆幽烷酞基辅酶A (THC-CoA或DHC-CoA), 后者进入过氧化物酶体，经p氧化最终生成胆酸 (或鹅脱氧胆 酸)。CYP7A1是胆汁酸合成的限速酶，其活性和表达量对胆 汁酸的合成起着制约作用。过氧化物酶体p氧化途径内催化加 水、再脱氢反应的酶蛋白是D-3一轻脂酞辅酶A脱水酶/D- 3一轻脂酞辅酶A脱氢酶，简称D-XX功能蛋白(D-bifunctional protein,DBP)，是胆汁酸合成所必需的蛋白质，但是它的表 达调控尚不清楚。 研究发现，胆固醇的代谢以及胆汁酸的合成受LXR(liver X-activatedreceptor)核受体的调节口LXR被配体激活后，与 特定的顺式作用元件 (LXRresponseelement,LXRE)结合， 调节与胆固醇代谢有关的LXR靶基因，如CYP7A1.ATP结 合盒转运蛋白A1(ABCA1).G1(ABCG1).G5(ABCG5). G8(ABCG8)等，维持胆固醇的代谢平衡。 研究发现，LXR的激活剂24(S)一经基胆固醇和T0901317 分别可使CV-1细胞及C57BL/6J小鼠肝CYP7A1的表达明显 中文 摘 要 增强，从而促进胆固醇向胆汁酸的转化。但是，LXR增强其 靶基因CYP7A1的表达的同时，是否也通过某种直接或间接 的方式，增加DBP的表达，协同CYP7A1的作用，增加月时十 酸的合成?未见报道。 高胆固醇饮食可增加大鼠肝脏CYP7A1和DBP的表达 (待发表)。是否是胆固醇被氧化成TI胆固醇，轻化固醇进而 激活LXR的结果?也有待证实。 为此，我们给予正常小鼠LXR的激动剂T0901317，增 加LXR靶基因CYP7A1、ABCG5,ABCG8的转录活性，观 察DBP的表达及活性变化，以及胆汁胆固醇、血清胆固醇的 变化。证明LXR增加胆汁酸的合成不仅与CYP7A1而且与 DBP的激活有关，探讨DBP的表达调控。 方法 1动物分组及取材 将8-10周龄成年雄性C57BL/6J小鼠25只，随机分为① 对照组 (Control组)和②给药组 (TO组)。TO组用LXR激 动剂T0901317灌胃(20mg/kg/day)，对照组只给予T0901317 的溶解剂灌胃。连续灌胃7天后，小鼠禁食不禁水一晚于次 日上午8点至下午4点将其处死。结扎胆总管5分钟，摘取 胆囊收集胆汁，用于胆固醇测定;摘取眼球收集血液，分离 血清，用于血清胆固醇测定;肝脏置液氮中，于一70℃保存， 用于RNA提取和DBP活性测定。 2血清和胆汁的胆固醇测定 用上海荣盛生物技术有限公司的总胆固醇测定试剂盒， 氧化酶法测定。 3肝匀浆的制备 ~~~~~~一~~，吮，，，，， 2 中 文 摘 要 称取0.25g小R冷冻肝脏，加lml匀浆缓冲液(50mmol/L 磷酸钾缓冲液，pH7.4,lmmol/L盐酸苯甲眯，1mmol/L苯甲 基磺酞氟，0.1% Tween-20，0.5mol/LNaCl，1mmol/L EDTANa3,5mmol/L0一琉基乙醇)，冰浴中匀浆，10000转/ 分离心，取上清液用于DBP的活性以及蛋白质含量的测定。 4DBP酶活性测定 以D-。)-3-轻基癸酞辅酶A作为底物，测定单位时间 内产物3-酮癸酞辅酶A的生成量。DBP酶活性用每毫克蛋白 所含酶的单位数表示 (U/mgprotein). 5肝脏总RNA的提取 用异硫氰酸孤一步法提取。 6mRNA表达的定量 0-actin作为内参照，RT-