一、利用基因工程技术改良超级稻亲本1826的品质和抗虫性二、植物抗病虫基因克隆和初步的研究.pdf

孔维文一复旦大学博士后研究工作报告 摘要 超级杂交水稻的培育、推广和应用可显著提高水稻的单位面积产量，但杂交 水稻的抗虫能力较低，品质也较差。培两优1826是一个优良的超级杂交水稻亲本 材料，产量高，但抗褐飞虱能力低，必需氨基酸赖氨酸的含量低，食用口感差。 35 本研究利用基因工程技术将CaMVS启动子91导的半夏凝集素基因(PTA)和 水稻胚乳特异表达启动子(Glutelin—B1 promoter)引导的马铃薯高赖氨酸蛋白基因 35 (船锕，)同时转入1826中，以期提高其抗褐飞虱能力和赖氨酸含量。将CaMV S启动子引导的半夏凝集素基因(PTA)和水稻蜡质基因启动子引导的水稻蜡质反 1826种子成熟胚进行了愈伤组织诱导，获得了800余粒1826成熟胚性愈伤组织， 获得愈伤组织的频率约为5％。对800余粒愈伤组织进行转化，获得77株再生苗， 其中26株为至少含～个外源基因的转基因植株，同时含两个外源目的基因的植株 有8株，共转化率为30．8％；其中同时含PTA和SB401的转基因植株有4株，同 时含PTA和Wxa的转基因植株也有4株。 转基因植物的安全性是基因工程改良作物的一个重要问题。构建含双边界序 列(双T-DNA区)载体，将选择标记基因和目标外源基因分开在不同的T-DNA 区，通过转基因植株有性杂交，可在转基因后代中获得无选择标记的转基因安全 植株。本研究构建了一个中问载体pAHCl7-PTA和两个含双边界序列的植物双价 T_DNA区，在其叶，～个T-DNA区，含两个目的基因的完整的表达盒，一个是由 动子(Glutelin．B1 是由水稻蜡质基因启动子引导的蜡质反义基因(Wxa)。 根据甘露糖结合凝集素基因的保守区域，利用同源克隆法从天南星科植物犁 头钉中克隆到甘露糖结合凝集素基因(TDA)全长eDNA。序列分析表明，该cDNA bp的开放阅读框架，可能编码一个含197个氨基酸的 全长870bp，含一个长594 凝集素前体，含三个可能的甘露糖结合位点。CLASTW系统进化分析显示，TDA 与其它16种植物来源的甘露糖结合凝集素可分成四个亚组，TDA与AlIA、PPA、 研究报告摘要 PTA和ZAA在同一亚组。Northern blot分析表明，TDA在块茎中表达量最高，而 在叶柄和叶片中表达量极低，几乎未检测到。将TDA克隆到pQE30中转化大肠杆 菌BL21进行原核表达分析，获得～个大小约22kD的蛋白质。 利用同源克隆法从甘蓝型油菜中克隆到“感病基因”B儿，全长eDNA。该 eDNA全长1787 bp，推测含一个长1503bp的开放阅读框架，可能编码一个含500 个氨基酸的蛋白质前体。序列比对显示，BPLl与拟南芥“感病基因”(隐性抗病 基因)PMR6核苷酸组成相似性达75．1％，两者编码的氨基酸序列相似性达87．4 ％，后者靠近5’末端比前者多出一段连续含12个丝氨酸的区域。BP上』的编码产 物可能是果胶酸裂解酶。SignalP分析显示，该推测的蛋白质前体可能含一段由22 个氨基酸组成的信号肽。13PLl可能的编码产物与其它9种植物果胶酸裂解酶类似 产物比对结果显示，存在一些极端保守的氨基酸。对16种不同生物的果胶酸裂解 酶类似产物的系统进化分析显示，来自植物的与来自微生物的果胶酸裂解酶类似 产物存在明显的差异，因而可将它们分成两个类群。 关键词：遗传转化超级杂交水稻亲本材料半夏凝集素基因妒rA)马铃薯高赖氨酸 植物双价表达 蛋白基因(SB401)水稻蜡质反义基因(Wxa)双边界序列 载体 犁头钉 甘蓝型油菜 甘露糖结合型凝集素 原核表达感病基 因果胶酸裂解酶基因 塾丝茎：里!：查堂堕主星婴壅兰三堡塑宣