低氧诱导因子-1α在小鼠铜绿假单胞菌肺炎中的作用的研究.pdf

目 录 1. 低氧诱导因子-1α 在小鼠铜绿假单胞菌肺炎中的作用研究…1 1.1 中文摘要…………………………………………………… 1 1.2 英文摘要………………………………………………………3 1.3 前言…………………………………………………………5 1.4 材料与方法……………………………………………………7 1.5 结果……………………………………………………………17 1.6 讨论……………………………………………………………27 1.7 结论……………………………………………………………32 1.8 参考文献………………………………………………………33 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………36 2 致谢……………………………………………………………38 3 综述……………………………………………………………40 低氧诱导因子-1α 在小鼠铜绿假单胞菌肺炎中的作用研究 摘 要 目的：通过研究低氧诱导因子-1α (Hypoxia inducing factor-1α) 在 铜绿假单胞菌肺炎模型小鼠肺组织中的表达情况，以及探讨 HIF-1α 与TNF-α、IL-8 之间的相关性，推测HIF-1α 在铜绿假单胞菌肺炎中 的可能作用，以期为铜绿假单胞菌肺炎的治疗寻找到新思路。方法： 1.将鼠龄6~8 周、体重25~30g 的清洁级健康雄性昆明小鼠120 只按 随机原则分成肺部感染组（PA 组：60 只）和正常对照组（生理盐水 组：60 只）。PA 组：氯胺酮麻醉小鼠后固定，常规消毒铺巾，严格无 菌操作，切开颈部皮肤，钝性分离至皮下组织，暴露上段气管，经气 管内穿刺注入铜绿假单胞菌（PA ）菌液（2 个麦氏单位浓度、0.03ml ） 建立小鼠铜绿假单胞菌肺炎模型；正常对照组：操作同PA 组，经气 管内穿刺注入无菌生理盐水 （0.03ml ）作为对照，两组均于造模成功 后第3、9、24 小时随机分别抽取20 只小鼠，予以留取标本后处死。 2.收集各组不同时间点处死的小鼠血液，离心分离血清后，以酶联免 疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbnent assay，ELISA ）检测血 清中 TNF-α、IL-8 的浓度；取右肺经 10%多聚甲醛固定后，切片行 HE 染色比较炎症的范围及程度，并行免疫组化染色检测肺组织中 HIF-1α 蛋白的表达水平；同时留取左侧肺组织行肺组织匀浆细菌培 养及菌落计数。3.应用SPSS17.0 软件对数据进行统计分析。结果：1、 PA 感染组小鼠肺组织病理改变在24 小时最为严重，炎症范围广，程 1 度重，3、9 小时与之相比均较轻，但均有明显的炎症改变；而对照 组的肺泡及肺间质结构基本正常，无明显出血及炎细胞浸润。并且 PA 感染组3、9、24 小时肺组织匀浆均培养出铜绿假单胞菌，菌落计 5 数均10 CFU/g，而对照组肺组织匀浆各时间点均未培养出细菌。2 、 PA 感染组3、9、24 小时小鼠肺组织中HIF-1α 蛋白的表达均有明显 的增高，其中细菌接种3 小时后HIF-1α 的表达就有升高，9 小时继 续升高，24 小时最高。而对照组HIF-1α 各时间点均未见明显表达。 3、PA 感染组3、9、24 小时小鼠血清中TNF-α、IL-8 的水平较对照 组均有明显的增高，差异有统计学意义（P ＜0.05 ）。其中TNF-α、IL-8 的水平均在3 小时开始上升，9 小时继续升高，24 小时最高。4 、HIF-1α 蛋白的表达与TNF-α、IL-8 的浓度呈正相关（相关系数分别为0.827 和 0.974 ）。结论：1. HIF-1α 参与了铜绿假单胞菌肺炎的炎症过程， 且炎症愈重表达愈明显。2. HIF-1α 是炎症细胞因子网络中的重要一 环，它与TNF-α、IL-8 等相互作用，促进炎症细胞合成及释放多种炎 症因子，在铜绿假单胞菌肺炎的发生发展中起了重要作用。 关键词：低氧诱导因子-1α 铜绿假单胞菌 炎症 2 The study on effect of Hypoxia inducing factor-1α in a murine model