纤溶酶原激活物抑制剂-1对大鼠胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制.pdfVIP

『『JIIf 1 1 附图…………………………………………………………………4 讨论…………………………………………………………………45 小结…………………………………………………………………48 参考文献……………………………………………………………48 结论…………………………………………………………………………52 综述 PAI．1与肺纤维化的关系………………………………………53 致谢…………………………………………………………………………70 个人简历……………………………………………………………………71 中文摘要 纤溶酶原激活物抑制剂．1对大鼠胚肺成纤维细胞 增殖和凋亡的影响及其机制 摘 要 研究背景及目的：特发性肺纤维化(idiopathic 是特发性间质性肺炎中最常见的一种类型，约占47％～71％，其预后差， 生存中位时间仅为3至4年。IPF主要病理特征为肺泡I型上皮细胞、血 管内皮细胞及基底膜的损害，并伴有嗜中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞 等炎症细胞浸润，同时肺泡II型上皮细胞与成纤维细胞异常增生，胶原过 度沉积。IPF的基本病因目前还不清楚，在以往的研究中多认为与多种细 胞因子参与的炎症和纤维化过程有关，如：转化生长因子．p(TGF—p)、肿瘤 刍苣 寸。 activator 纤溶酶原激活物抑制剂．1(Plasminogen 的主要作用是抑制尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinaSe．typeplasminogen plasminogen 研究认为，在肺纤维化的发展过程中，PAI．1调节体内多种细胞如白细胞、 纤维母细胞的黏附和移行，进入损伤组织，并与多种细胞因子TGF．p、 n师．0【、PDGF等相互作用，进一步上调自己的表达，使PAI．1大量分泌， 活性升高，u．PA活性降低，纤溶系统受到损害，不能完全清除已形成的纤 维蛋白，从而加速肺纤维化的发生发展。虽然IPF潜在的发展机制不清楚， 最新的证据表明，增加PAI．1的表达对IPF发病机制有很重要贡献。博莱霉 表达减轻肝纤维化的报道。 体外研究表明，PAI．1可以促进肝星状细胞、血管平滑肌细胞增殖， 并抑制其凋亡。本研究中，为了探讨PAI．1在肺纤维化发生中的作用，我 们将体外培养的大鼠胚肺成纤维细胞加入外源性PAI．1，观察成纤维细胞 增殖、转化、胶原合成的变化。进一步通过n师一0【诱导成纤维细胞凋亡 中文摘要 后，观察PAI．1对体外培养的大鼠胚肺成纤维细胞自发及诱导凋亡的影响 及机制。 方法： l外源性PAI。l对成纤维细胞增殖的影响及信号转导通路 将冻存的大鼠胚肺成纤维细胞复苏后，分为以下三组：Comrol组、 PAI．1组和TGF．p组。在培养液中分别加入相应的物质使其浓度分别达到 20 n∥ml(P甜．1)和2n∥ml(TGF．D)。我们前期研究结果表明，这一浓 度促进成纤维细胞增殖最明显。应用westem h、48 blotting法分别测定24 h h和72 用RT．PCR和RealtimePCR分别测定24h的P甜．1、a．SMA、I型胶原、 h、48 III型胶原训刚A的表达；应用激光共聚焦显微镜观察24h细胞内 游离Ca2+浓度的变化。 2外源性PAI．1对成纤维细胞凋亡的影响及信号通路 将冻存的大鼠胚肺成纤维细胞复苏