《%9a%84人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用》.pdf

RhoA/Rho激酶信号通路在TGF-β1诱导的 人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用 胡永亮 刘真 焦大凯 马恬 王常勇 贾赤宇 目的 观 察 TGF-[1对 人 皮 肤 成 纤 维 细 胞 表 型 转 化 的作 用 是 否 受 到 RhoA/Rho激酶 信号通路的影响，以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法 原代培养人皮 肤成纤维细胞，将第4代细胞用TGF-β1(10ng/ml)刺激后，分不同作用时间(0、3、6、24h)提取细胞 内总蛋白。BCA法测定总蛋白浓度，Western-blot检测α-SMA的表达水平；并用相同的方法检测不 同浓度TGF-β1(0、2、10、50ng/ml)刺激人皮肤成纤维细胞后，α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin，α-SMA)的表达水平。用RhoA/Rho激酶信号通路阻断剂Y-27632处理后，再用TGF-β1刺激， 作为实验组，将未作处理的正常细胞作为空白对照组，Y-27632（10μmol/L）组作为阴性对照组，只 用TGF-β1(10ng/ml)刺激组作为阳性对照组，分别检测α-SMA的表达差异。使用ANOVA对蛋白 表达量进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。结果 10ng/mlTGF-β1按不同作用时间 刺激人皮肤成纤维细胞后，α-SMA的表达量分别为：0h为1.0，3h为1.9+0.2、6h为2.1±0.1, 24h为3.1±0.1。24h较其他3个时间点α-SMA表达量明显上升 （n=4，P＜0.05）。不同浓度 TGF-β1刺激人皮肤成纤维细胞后，α-SMA的表达量分别为：0ng/ml为1.0，2ng/ml为1.4±0.2， 10ng/ml为3.2±0.1，50ng/ml为3.1±0.2。10ng/ml表达量明显高于0ng/ml和2ng/ml(n=4， P＜0.05)，较50ng/ml差异无统计学意义(n=4，P＞0.05)。用Y-27632（10μmol/L）处理后，再用 TGF-β1刺激，细胞的表型转化明显受到抑制，实验组 α-SMA的表达量(1.2±0.2)较阳性对照组 (2.9±0.1)明显降低(n=5，P＜0.05)，与空白对照组(1.0)和阴性对照组(1.1±0.1)相比差异均 无统计学意义(n=5，P＞0.05)。结论 RhoA/Rho激酶信号通路参与了 TGF-β1诱导的人皮肤成纤 维细胞表型转化过程。 成纤维细胞； RhoA/Rho激酶信号通路；转化生长因子β1； α-平滑肌肌动蛋 白 TheeffectofRhoA/RhokinasesignalpathwayonTGF-β1-inducedphenotypicdifferentiationof humandermalfibroblasts HUYong-liang LIUZhen JIAODa-kai MA TianWANGChang-yong JIAChi-yu CenterofPlasticSurgeryandBurnRepair,309thHospitalofPLA,Beijing 100091,China Objective ToexaminetheeffectofRhoA/RhokinasesignalpathwayonTGF-β1- inducedphenotypicdifferentiationofhumandermalfibroblasts.Methods The4thgenerationofprimary culturedhumandermalfibroblastswerestimulatedwithTGF-β1(10ng/ml).Theexpressionofα-SMAwas detectedaftertreatmentwithTGF-β1for0,3,6,and24h.Theexpressionoft-SMAwasalsodetected aftertreatmentwithdifferentconcentrationofTGF-β1(0,2,10,50ng/ml). Thenthehumandermal fibroblasts(4thgeneration)werestimulatedwithTGF-31(10ng/ml)afterbeingtreatedwiththeRhoA/Rho kinasesignalingpathwayinhibitorY-27632(l0umol/ml). Thefibroblastsweretreatedwithnothin