生化实验六 酶的基本性质.docVIP

课程名称： 生物化学实验 指导老师： 史影 成绩： 实验名称： 酶的基本性质实验——底物专一性、激活剂和抑制剂、最适温度 同组学生姓名： 陈莞尔，潘盛警 Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性 一、实验目的 1.了解酶的专一性。 2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。 3.学会排除干扰因素，设计酶学实验。 二、基本原理 酶是具有高度专一性的有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶促反应要比无机催化反应快数十倍。 酶催化的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对一种或一类底物其催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，可分成下列几种： 1.相对专一性。一种酶能催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。 2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。 3.立体异构专一性：有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。 本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。用Benedict试剂检测反应产物。 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化铜沉淀。 Na2CO3+ 2H2O 2NaOH + H2CO3 CuSO4+ 2NaOH Cu(OH)2+ Na2SO4 还原糖(—CHO or —C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O + 2H2O + 糖的氧化产物 （黄色或砖红色） 淀粉和蔗糖无半缩醛基，无还原性，与Benedict试剂无显色反应。淀粉被淀粉酶水解后产生葡萄糖，蔗糖被蔗糖酶水解后产生果糖和葡萄糖，产物都是还原糖，因此能被Benedict试剂氧化生成砖红色的Cu2O沉淀。 三、实验材料与试剂 1、实验材料 ⑴ 蔗糖酶(样品Ⅳ）； ⑵ 新鲜唾液（含唾液淀粉酶）； 2、实验试剂 ⑴ 蔗糖酶液 蔗糖酶液(样品Ⅳ）加蒸馏水适当稀释，备用； ⑵ 唾液淀粉酶液（学生自制） 取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸馏水（稀释）到25ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50～400倍，甚至更高； ⑶ 5%蔗糖（A.R.）溶液； ⑷ 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）； ⑸ Benedict试剂 ； 四、实验器材与仪器 1.漏斗， 2.脱脂棉花； 3.恒温水浴（37℃，100℃）； 4.量筒；5.试管；6.烧杯；7.吸量管。 五、实验内容 酶的专一性实验，按下表操作。 检查试剂 淀粉酶的专一性 蔗糖酶的专一性 编号 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨ 0.5%淀粉（0.3%NaCl） 溶液 (ml) 3 3 3 5%蔗糖溶液 (ml) 3 3 3 蒸馏水 (ml) 3 3 3 唾液淀粉酶液 (ml) 1 1 1 蔗糖酶溶液 (ml) 1 1 1 摇匀，置37℃水浴保温10min Benedict试剂 (ml) 2 2 2 2 2 2 2 2 2 摇匀，置沸水浴煮2～3min 记录观察结果 蓝色 蓝色 蓝色 砖红色 蓝色 蓝色 蓝色 黄绿色 蓝色 六、结果分析和讨论 结果：⑴ ①、②、③号试管均呈硫酸铜的蓝色，说明这3支试管内无还原糖，淀粉和蔗糖均未水解； ⑵ ④号试管呈砖红色说明试管内淀粉被水解，⑤号试管呈蓝色说明试管内蔗糖未水解，⑥号试管呈蓝色说明无还原糖，从这三支试管看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有对淀粉的底物专一性； ⑶ ⑧号试管呈黄绿色，说明试管中部分蔗糖被水解，但未水解完全，⑦号试管呈蓝色说明淀粉未水解，⑨号试管呈蓝色说明无还原糖，从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解有催化作用，对淀粉无催化作用，具有对蔗糖的底物专一性。 七、思考题 1．观察酶专一性实验为什么要设计这3组实验？每组各有何意义？蒸馏水有何用？ 答：第