金属标记结合生物质谱地蛋白质组相对定量及绝对定量新方法研究.pdf

安徽医科大学 目 录 中文摘要 1 英文摘要 3 第一章 前言 6 1.1 定量蛋白质组学 6 1.2 稳定同位数标记在定量蛋白质组学中的应用 6 1.3 金属元素标记在定量蛋白质组学中的应用 8 1.4 基于质谱技术的蛋白质N-末端肽的鉴定及相对定量 9 1.5 双重等重标记的蛋白质组定量技术 10 1.6 本论文研究内容 12 第二章 金属元素标记结合质谱用于蛋白质N-末端肽的鉴定及相对 定量新方法研究 14 2.1 实验部分 14 2.1.1 仪器与试剂 14 2.1.2 实验方法 15 蛋白质胍基化修饰 15 安徽医科大学 蛋白质金属标记和酶切 15 表明键合DITC 的硅球合成及与酶切肽段的结合 15 腾冲嗜热菌全蛋白的提取 15 2. 1.2.5 金属元素对腾冲嗜热菌全蛋白样本N-末端肽的标记.. 16 质谱分析 16 2.2 结果和讨论 17 2.2.1 实验原理 18 2.2.2 蛋白质N-末端肽胍基化效率考察 19 2.2.3 蛋白质N-末端肽金属标记条件优化 20 2.2.4 基于DITC-硅球的N-末端肽的分离及质谱鉴定 20 2.2.5 基于N-末端肽的蛋白质相对定量 23 2.2.6 不同温度培养腾冲嗜热菌N-末端肽的鉴定及相对定量. 25 2.3 本章小结 33 18 第三章 0/金属等重标记结合质谱的蛋白质组绝对定量新方法研 究………………………………………………………………………34 3.1 实验部分 34 安徽医科大学 3.1.1 仪器与试剂 34 3.1.2 实验方法 35 人肝微粒体定量串联体蛋白的制备 35 .1 人肝微粒体QconCAT 质粒构建 35 .2 QconCAT 的表达和纯化………..…………………….35 定量肽段和内标肽段的制备……………………35 18 .1 QconCAT 蛋白的酶切及 O 标记 36 .2 18O/16O 肽段的金属标记……………………………..36 人肝微粒体蛋白质的提取、酶切和金属标记………...37 质谱分析………………………………………………...37 3.2 结果与讨论 39 3.2.1 18O/金属等重标记的原理和技术路线 39 3.2.2 18O/金属等重标记用于蛋白质绝对定量分析实验流程...40 3.2.3 18O/金属等重结合质谱蛋白质组绝对定量方法的建立...40 18O/金属标记效率的考察 40 安徽医科大学 18O/金属标记肽段的稳定性考察 44 18O/金属标记肽段在食谱碰撞池中的碎裂行为考察... 45 定量肽段母子离子对选择及质谱参数优化 ………….46 18O/金属标记肽段的色谱保留时间考察 47 定量肽段标准曲线的建立 48 18O/金属等重标记结合质谱的蛋白质组绝对定量方法的 应用……………………………………………………...…….………..………….49 3.3 本章小结 52 参考文献 53 综述 62 安徽医科大学 金属标记结合生物质谱的蛋白质组相对定量及绝对定 量新方法研究 摘要 随着蛋白质组学研究的深入，蛋白质组学已经进入大规模定量的时代。但是 目前蛋白质的定量方法仍然不够完善，发展规模化、准确度高的定量方法