迷迭香酸对局灶性脑缺血再灌注损伤小鼠地脑保护及作用机制研究.pdf

附图……………………………………………………………………．80 讨论……………………………………………………………………．84 小结……………………………………………………………………．86 参考文献………………………………………………………………．87 结j殓…………………………………………………………………………．90 综述一………………………………………………………………………．91 综述二………………………………………………………………………101 致谢…………………………………………………………………………117 个人简历……………………………………………………………………118 中文摘要 迷迭香酸对局灶性脑缺血再灌注损伤小鼠的脑保护及作用 机制研究 摘 要 随着我国人口老龄化进程的加速，脑血管病(脑卒中)已成为危 害人类健康和生命的主要疾病。缺血性脑血管病最常见，且其复发率、 致残率高居不下，给社会造成沉重的经济负担。 脑是一个对缺氧最敏感的器官，脑重量仅占人体重量之2％，脑 耗氧量却占人体总耗氧量的20％。脑组织发生缺血后早期、及时、有 效的恢复血供是治疗的关键，组织纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen 急性缺血卒中治疗的首选药物。然而，缺血脑组织实现血流再通的同 时带来的再灌注损伤一直困扰着临床的治疗和预后。脑缺血及再灌注 损伤的病理生理机制复杂，认为存在多种机制相互作用形成的复杂调 控网络，包括炎症损害、自由基损伤、氧化应激、兴奋性氨基酸毒性、 细胞内钙超载等，直接／间接导致神经细胞凋亡／死亡，血脑屏障破坏， 最终导致神经功能的缺失，甚至危及患者生命。 因此，积极寻求有效的神经保护剂是一直以来缺血性卒中研究的 重点，尽管动物实验取得了一定的效果，但目前为止尚没有临床证实 有明确疗效的神经保护剂。近年来在细胞实验和动物实验中应用天然 植物有效成分及其制剂治疗急性卒中成为研究的热点，为新型神经保 护剂的研制提供了广阔的思维空间。迷迭香酸(Rosmarinic acid，gn) 是天然存在于多种植物中的一种多酚，也是丹参多酚酸的主要成分之 一，具有抗氧化、抗炎、抗凋亡、抗肿瘤等多种生物活性，且在多 种疾病模型中证明有效，而其在缺血卒中治疗的研究鲜见报道。因此， 本课题旨在研究迷迭香酸作为新型神经保护剂的可能性及潜在的神 经保护机制，为临床治疗提供新的实验依据。 本研究选用成年健康雄性CDl小鼠，建立局灶性脑缺血再灌注 中文摘要 死体积、脑含水量、神经功能缺损评分，TUNEL染色评价细胞凋亡 Bax的表达调节，以期初步探讨其在缺血再灌注损伤后的脑保护作用 机制；应用HO．1活性抑制剂和P13K／Akt信号通路抑制剂进一步探 讨Nrf2／HO．1通路激活在迷迭香酸发挥神经保护作用中的重要地位。 本研究分三部分，现将各部分内容概述如下。 第一部分迷迭香酸对局灶性脑缺血再灌注损伤小鼠的抗氧化及抗 凋亡机制研究 目的：观察缺血再灌注小鼠脑缺血损伤后24h梗死体积、神经 酸对缺血再灌注损伤小鼠的抗氧化及抗凋亡机制。 方法：选用成年健康雄性CD．1小鼠为研究对象，采用改良Longa 线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注(MCAO／R)模型。实验1：观察 迷迭香酸的神经保护作用。实验动物随机分为5组，假手术组(Sham)， 假手术后腹腔注射等量生理盐水；手术组(MCAO／R)，再灌注后腹 腔注射等量生理盐水；迷迭香酸小剂量组(RA—L)，再灌注后立即腹 腔注射迷迭香酸10 mg／kg；迷迭香酸中剂量组(RA．M)，再灌注后 立即腹腔注射迷迭香酸20 mg／kg；迷迭香酸大剂量组(RA．H)，再 灌注后立即腹腔注射迷迭香酸40 h取材前