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蓝细菌光受体色素化及晶体结构研究
目 录
摘要…………………………………………………………………………………．i
Abstract……………………………………………．……………………………………………………………lol01,
1序言…………………………………………………………………………………．1
1．1蓝细菌概述………………………………………………………………………l
1．2藻胆蛋白结构……………………………………………………………………2
1．3光敏色素的发现…………………………………………………………………3
1．4光敏色素蛋白的特征……………………………………………………………4
1．5植物光敏色素蛋白的功能………………………………………………………6
1．6蓝细菌光敏色素蛋白的发现……………………………………………………7
1．7蓝细菌光敏色素的结构与特征…………………………………………………8
1．8蓝细菌光敏色素的合成………………………………………………………．11
1．8．1藻胆色素的生物合成………………………………………………………1l
1．8．2蓝细菌光敏色素的生物合成………………………………………………14
1．8．3蓝细菌光敏色素生物合成的优化…………………………………………14
1．9蓝细菌光敏色素蛋白的应用…………………………………………………．．15
1．10新型荧光蛋白探针的开发……………………………………………………16
1．1l课题的研究目的与意义………………………………………………………18
2蓝细菌光敏色素GAF结构域色素化生成橙色荧光蛋白的研究……………………20
2．1引言……………………………………………………………………………20
2．2材料与仪器……………………………………………………………………．21
2．2．1菌种与质粒………………………………………………………………．．21
2．2．2培养基及试剂……………………………………………………………．．2l
2．2．3主要仪器…………………………………………………………………．．24
2．3实验方法………………………………………………………………………．24
2．3．1
GAF结构域搜索比对………………………………………………………24
2．3．2表达质粒的构建…………………………………………………………．．25
华中农业大学2014届博士研究生学位(毕业)论文
2．3．3重组色素蛋白菌株的构建………………………………………………．．28
2．3．4色素蛋白的大量表达……………………………………………………。28
23．5色素蛋白的纯化…………………………………………………………。29
2．3．6蛋白质的检测……………………………………………………………．29
2．3．7光谱分析…………………………………………………………………．30
2．3，8色素蛋白的变性实验……………………………………………………．．3l
2．3．9荧光量子产率和摩尔消光系数计算………………………………………31
2．3．10用荧光色素蛋白标记活体细胞的显微镜检测…………………………。3l
2．4实验结果及分析………………………………………………………………．32
2．4．1CBCRs
GAF结构域氨基酸序列…………………………………………．32
2．4，2重组色素蛋白的表达鉴定………………………………………………．．36
2．4．3光化学性质分析…………………………………………………………一37
2．4．4荧光量子产率和摩尔消光系数计算结果…………………………………42
2．4．5荧光显微镜结果…………………………………………………………。．47
2，5小结与讨论……………………………………………………………………47
3GAF结构域基因与色素合成酶基因的融合………………………………………．49
3．1引言……………………………………………………………………………49
3．2材料与仪器…………………………………………………………………
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