转基因动物_ZHY0905.ppt

动 物 细 胞 工 程 制 药 生物合成 2009-05 动物细胞工程制药 一、培养动物细胞以获得多肽和蛋白质类药物 二、采用遗传操作技术定向改造动物和动物细胞的遗传性状，利用转基因动物或转基因动物细胞生产疫苗、多肽和蛋白质。 涉及到的技术：动物细胞培养、细胞融合、细胞大规模培养、动物细胞反应器、核移植、染色体改造和转移技术、转基因动物技术等 第一节 生产用动物细胞动物细胞分类 1、贴壁依赖性细胞 概念：anchoraged-dependent cell 需要有适量带电荷的固体或半固体支持表面才能生长的细胞 大多数动物细胞都属于此类。 2、非贴壁依赖性细胞 概念：anchoraged-independent cell 不依赖于固体支持物表面生长的细胞，可在培养液中悬浮生长，被称为悬浮细胞。 举例：血液、淋巴细胞、肿瘤细胞和某些转化细胞，Namalwa细胞。 3、兼性贴壁细胞 概念： 对支持物的依赖性不严格，既可贴壁生长，也可悬浮生长。 举例：CHO细胞、BHK细胞、L929细胞。 理想的药物生产细胞系 接触抑制 概念：contact inhibition 细胞在生长基质上分裂增殖，逐渐汇集成片，当每个细胞与其周围的细胞互相接触时，细胞就停止增殖。 特点：保持充足的营养，细胞仍可存活一段时间，但细胞密度不再增加。 有：大多数细胞 无：少数悬浮培养细胞（癌细胞） 动物细胞的特点 无细胞壁 倍增时间长，生长缓慢 需氧量少，对搅拌敏感 聚集体形成 原代细胞培养50代即开始退化 动物细胞培养 动物细胞或组织培养是从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。 生产用动物细胞 原代细胞 二倍体细胞 转化细胞 基因工程细胞 1、原代细胞 直接取自动物组织、器官，经粉碎、消化而获得的细胞悬液 常用的原代细胞：鸡胚细胞、原代兔肾或鼠肾细胞、血液的淋巴细胞 缺点：需要大量动物组织 2、二倍体细胞 原代细胞经过传代、筛选、克隆，从而从多种细胞成分的组织中挑选并纯化出具有一定特征的细胞株。有正常细胞的特点： 其染色体的组型2n 具有明显的贴壁吸附和接触抑制特性 只有有限的增殖能力，传代50次 无致瘤性 常用的细胞：WI-38, MRC-5, 2BS W1-38 W1-38：正常胚肺组织人二倍体细胞系。 核型为2n=46。成纤维细胞， 能产生胶原，培养基用BME （Eagle’ Basal medium）。 10%小牛血清，pH7.2,同工酶为G6PD B型。 倍增时间为24h，有限寿命50代。 安全，用于制备疫苗。 MRC-5：从正常男性肺组织中获得的人二倍体细胞系。 核型为2n=46。 属成纤维细胞。 培养基用加小牛血清。 同工酶G6PD B型。 有限寿命42～46代。增殖速度较W1-38 快， 对不良环境敏感性较W1-38低。 对人的病毒敏感。 用于生产疫苗。 3、转化细胞 通过某个转化过程形成 染色体断裂成异倍体 无正常细胞特点 具有无限增殖能力 常用的细胞：Namalwa、CHO、BHK-21、Vero CHO-K1：从中国地鼠卵巢中分离的上皮样细胞。 核型： 2n=20～22。 培养基：DEME培养基 0.1mmol/L次黄嘌呤，0.1mmol/L胸苷， 10%小牛血清， 加入脯氨酸。 BHK-21: 从5只无性别的生长1天的地鼠幼鼠肾脏中分离的; 成纤维样细胞,核型为2n=44; 培养基为DMEM加7%胎牛血清。 用于增殖病毒，包括多瘤病毒、口蹄疫病毒、狂犬病毒等并制作疫苗，现已用于工程细胞构建。 Namalwa：从肯尼亚患有淋巴瘤病人获取，建成的人的 类淋巴母细胞。 2.8%的高倍体率，12～14条标记染色体。单条X，无Y。 培养基为RPMI 1640，添加7%胎牛血清。 用于生产α干扰素。 Vero：从正常成年非洲绿猴肾脏分离的。 为贴壁依赖的成纤维细胞，