上海市进口火龙果软腐病病害分析.docVIP

上海市进口火龙果软腐病病害分析 ? ??????? 火龙果(Hylocereus undatus?Britt.et Rose)属仙人掌科三角柱属植物,?原产于西半球赤道附近中美洲热带雨林区域,?人工栽培遍及中美洲、以色列、越南、泰国、美国南部、我国台湾地区和海南、广东等地。火龙果的经济价值高,?营养丰富,功能独特,?含有一般植物少有的植物性白蛋白、花色素、可溶性膳食纤维和多种矿物质营养元素及人体所必需的8?种氨基酸,?具有美容和保健的双重功效。近年来,?火龙果作为一种营养价值高且口感好的水果,?受到消费者的广泛青睐,?然而,?国产火龙果数量远远满足不了人们的需求,?大量火龙果需要依赖于进口。仅2010?年1?4?月,?越南、泰国等东盟国家通过广西口岸出口到我国的火龙果就达3.4?万t。 上海市水果市场销售的火龙果也主要依赖于从国外进口。我们在对进口水果市场病害调查的过程中发现,?进口火龙果上存在大量的市场病害,?如镰刀菌(Fusarium?spp.)、链格孢菌(Alternaria?spp.)、炭疽菌(Colletotrichum?spp.)等都能够危害市售进口火龙果。前人对火龙果病害的研究多集中在采前田间病害,?而在采后病害方面报道很少,?仅马腾飞等的研究表明,?镰刀菌(Fusarium?spp.)和链格孢菌(Alternaria?spp.)是市售进口火龙果的主要市场病害, Taba?等的研究表明,?Bipolaris cactivora?是日本火龙果的主要市场病害;?另外,?卢琨等研究认为火龙果采后贮藏病害主要是砖红镰刀菌(Fusariumlateritium?Nees)、黑曲霉(Aspergillus niger?V. Tiegh)和黄曲霉(Aspergillus flavusLink)。由于火龙果的消费需求不断扩大,?其来源又主要依赖于进口,?因此对进口火龙果病原物的检验检疫和分析鉴定,?减少采后流通过程中的损失极为重要。本研究以上海市水果市场销售的进口火龙果为研究对象,?通过病原形态学与分子生物学相结合的方法,?对进口火龙果市场病害进行分离与鉴定,?发现尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)是引起进口火龙果采后软腐的最主要病原菌,?此外,?我们还对该菌的重要生物学特性进行了研究,?探明影响其正常生长的环境条件,?从而丰富了国内关于进口火龙果市场病害的研究,?为进一步研究其发病机理提供理论依据,?也为制定更健康环保的果蔬保鲜措施提供新思路。 1?材料与方法 1.1?材料 供试进口火龙果于2009?年3?月至2010?年7?月购自上海市水果销售市场(农工商超市、好又多大卖场、鲜果多水果超市)。 1.2?方法 1.2.1?病原真菌分离及其致病性鉴定:?从病组织边缘切取病健交界处组织块(约4 mm×6 mm)和果实内部健康果肉进行表面灭菌,?放入马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板培养基中25 ?条件下培养2?3 d。当菌落直径长至1 cm?时,?用接种针挑取菌落边缘幼嫩菌丝转入另一PDA?平板内继续培养,?重复3?次即可获得纯化菌种。无菌打孔器取直径5 mm的待鉴定菌菌碟,?并分别以有伤与无伤两种方法接种健康火龙果果实,?放入无菌干燥器内, 25 ?条件下饱和湿度放置7 d,?记录致病症状并镜检观察病原菌的孢子形态。接种用病原菌的制备、被接种果实的准备及有伤、无伤接种方法参考许玲等方法。 1.2.2?病原真菌的形态学鉴定:?观察感病火龙果外观发病症状,?体视显微镜下观察发病组织中有无病原菌菌丝。在PDA?培养基上培养观察其菌落特征,诸如颜色、气味、生长速度、气生菌丝形态等;?用合成低营养培养基(SNA)[22]或Bilay?培养基[23]培养观察镰刀菌属真菌的显微特征,?镰刀菌种的鉴定所依据的显微特征主要包括大、小型分生孢子的产生情况及其形态;?厚垣孢子的有无和产生方式;?产孢细胞的类型等等。依据上述指标参照Booth和邵力平等真菌形态学鉴定手册方法鉴定分离所得致病菌的种类。 1.2.3?病原真菌的分子生物学鉴定:?(1)?基因组DNA?的提取。称取0.05 g?在PDA?培养基上生长7 d?的待鉴定病原菌菌丝,?参考刘少华等的方法提取病原真菌基因组DNA,??20 ?条件下保存备用。 (2)?病原真菌rDNA-ITS?序列测定及其系统发育地位分析。利用通用引物ITS1 (5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4 (5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)扩增病原真菌基因组上保守的ITS?序列,?用以在分子水平上鉴定病原菌。20?μL PCR?扩增体系如下: 10×buffer 2?μL, MgCl2 2μL, 2.5 mmol/LdNTPs, 1.0?个单位Taq?DNA?聚合酶