刺梨半乳糖磷酸酶基因的表达及其与AsA积累的关系.docVIP

园 艺 学 报 2014，41（6）：1175–1182 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2014–01–14；修回日期：2014–04–09 基金项目：国家自然科学基金项目31060257）；贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目（黔省专合字201012）；贵州 省重大科技专项（黔科重大专项1） * 通信作者 Author for correspondence（E-mail：anhuaming@） 刺梨GDP-L–半乳糖磷酸酶基因的表达及其与 AsA积累的关系 孙雅蕾，杨 曼，安华明* （贵州大学农学院，贵州省果树工程技术研究中心，贵阳 550025） 摘 要：采用RT-PCR和RACE技术，从刺梨（Rosa roxburghii Tratt）果实中扩增出GDP-L–半乳糖 磷酸酶（GDP-L-galactose pyrophosphatase，GGP）基因的全长cDNA序列，并分析其在不同组织和果实 不同发育阶段的表达特点及其与AsA积累的关系。结果表明：刺梨GGP基因cDNA（RrGGP，GenBank 登录号：HM998753）包含1个长度为1 341 bp的开放阅读框（ORF），编码445个氨基酸；其氨基酸序 列与苹果、猕猴桃等的相似性均在80%以上。RT-PCR分析表明，该基因在刺梨不同器官中的表达差异明 显：在果实中的表达量最强，叶中次之，而花和茎中只能检测到极微弱的表达。在果实不同发育时期都 能检测到RrGGP的表达，在发育初期（花后50 d内）表达较弱，花后60 ~ 100 d呈高水平表达，而后随 着果实成熟而下调。刺梨中RrGGP的表达特点与AsA积累高度一致，意味着该基因可能是果实发育过程 中AsA合成的关键基因。 关键词：刺梨；GDP-L–半乳糖磷酸酶；基因表达；AsA 中图分类号：S 661 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1175-08 Expression of GDP-L-galactose Pyrophosphatase and Its Relationship with Ascorbate Accumulation in Rosa roxburghii SUN Ya-lei，YANG Man，and AN Hua-ming* （Guizhou Engineering Research Center for Fruit Crops，Agricultural College，Guizhou University，Guiyang 550025，China） Abstract：A full length cDNA encoding GDP-L-galactose pyrophosphatase（GGP），a key enzyme in the putative L-ascorbic acid（AsA）biosynthetic pathway of higher plants，was obtained from Rosa roxburghii Tratt fruits using RT-PCR and RACE technology. This cDNA，designated RrGGP（accession number，HM998753），contained an open reading frame（ORF）of 1 341 bp，encoding a protein of 445 amino acids. Sequence analysis indicated that its deduced amino acid showed over 80% identities with the corresponding proteins from other plant species. Semi-quantitative RT-PCR showed that the expression of RrGGP in fruits was significantly abundant than that of in leaves，flowers or stems，respectively， contributing to pa