CHO细胞源性二肽基肽酶Ⅳ抑制剂筛选模型的建立及食药用菌活性提取物筛选.pdfVIP

食用菌学报@2015．22(1)：55~60 DOI：j．cnki／1005—9873．2015．O1．011 CHO细胞源性二肽基肽酶 IV抑制剂筛选模型的 建立及食药用菌活性提取物筛选 张 超 一，杨 焱 ，汪雯翰 ，樊 华。，颜梦秋 ，冯 娜 ，张劲松 (上海市农业科学院食用菌研究所 ，农业部南方食用菌资源利用重点实验室，国家食用菌工程技术研究中心 ， 国家食用菌加工技术研发分中心，上海市农业遗传育种重点开放实验室，上海 201403；上海海洋大学食 品学院， 上海 200234；。德 国夏洛特医学院实验医学，l临床医学和病理生物化学研究所 ，德 国柏林 13353) 摘 要 ：建立 中国仓 鼠卵巢 (CHO)细胞来源 的二肽基肽酶Ⅳ(DipeptidylpeptidaseIV，DPPIV)抑制剂筛选 模型并对多种食药用菌提取物及萃取物抑制DPPIV活性的效果进行研究。以H-甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺 (H．Gly—pNA·HC1)为反应底物 ，通过发色底物法检测 CHO细胞来源 DPPIV 的活性 ，优化 的筛选模型条件 为 ：底物浓度 90mmol／L、显色时间60min、孵育温度 37℃、pH7．6，阳性对照药物 Ile—Pro-Ile的最佳作用浓 度 5mmol／L。利用此模 型检测供试样品抑制 CHO细胞源性 DPPIV活性结果表明，鲍姆木层孔菌(Phellinus baumii)和灵芝 (Ganodermalucidum)醇提物的抑制效果 明显好于其他 7种食用菌 ；鲍姆木层孔菌及灵芝 的石 油醚、氯仿 、乙酸乙酯和正丁醇等 四种萃取物在 10~g／mL和 100 g／mL浓度下均具有一定抑制效果，其 中鲍 姆木层孔菌及灵芝的乙酸 乙酯萃取物抑制效果较好 。 关键词 ：二肽基肽酶 IV抑制剂 ；筛选模型；食药用菌；II型糖尿病 二肽 基 肽酶 IV(DipeptidylpeptidaseIV， 建立一个能够筛选 天然产物二肽基肽酶 IV DPPIV)属于脯氨酰寡肽酶家族 中的丝氨酸蛋 抑制剂的模型，有助于高效快捷地检测天然产物 白酶 ，广泛分 布 于 内皮 细胞 和分化 成熟 的上皮 的二肽基肽酶 IV抑制活性。但 目前市场上已有 细胞的游离缘 中口]，作用于底物氮末端第二位 的多种商业化 DPPIV 因价格 昂贵 ，而不适合用 的脯氨酸或丙氨酸部位而劈开蛋 白或多肽_2]。 于大 批 量 样 品筛 选 。中 国仓 鼠卵巢 (Chinese 胰升糖素样肽-1(glucagon—likepeptide一1，GLP- hamsterovary，CHO)细胞能够高效扩增和表达 1)是一种餐后 由小肠分泌 的肠促胰 岛素激素 ， 重组基因，并且其 自身 内源蛋 白分泌很少 ，具有 能够增加胰 岛素分泌 ，抑制胰 高血糖素分泌 ，影 产物胞外分泌功能 ，利于外源蛋 白的后期分离纯 响葡萄糖 的代谢 ，有效控制血糖水平口．5l。GLP． 化口圳，因此 CHO细胞是生产 DPPIV 的最佳细 胞源之一。笔者从 DPPIV／CHo工程株细胞 中 1氮末端第二位为丙氨酸 ，是 DPPIV 作用底物 提取DPPIV，旨在建立一个简便快捷的适合筛选 之一 ¨6]。慢性轻度 炎症等 引起机体 DPPIV活 食药用菌源 DPPIV 抑制剂 的筛选模型 ，并通过 性异常表达 ，过度降解 GLP．1，从而诱发 II型糖 此模型从食药用菌中快速寻找具有 DPPIV抑制 尿病 。 作用的活性物质 。 目前 已有多种 以二肽基肽酶 IV为靶 点 的 糖尿病治疗药物上 市应用于 临床治疗 ，如西格 1 材料与方法 列汀 、维达列汀等 ]，而这些合成类药物常伴