与烟草曲茎病毒相伴随的DNAβ的βC1基因原核表达及蛋白的单抗制备.pdf

维普资讯 浙江大学学报 (农业与生命科学版) 3l(2)：132～136，2008 JournalofZhejiangUniversity(Agric．＆LifeSci．) 文章编号 2008)020132-05 与烟草 曲茎病毒相伴随的DNAli的 J6a『基 因原核表达及蛋白的单抗制备 姜 磊，吴建祥，周雪平 (浙江大学 农业与生物技术学院 物技术研究所，浙江 杭 州 310029) 摘 要 ：将 PeR扩增的烟草曲茎病毒 (Toba~c0curlyshootvirus，FbCSV)Y35分离物5Cl基 因克隆到 pET32a原核表达裁体，构建原核表达重组载体 pET32aY35~lC1．重组裁体导入大肠杆菌BI21(DE3)， 经过 IPTG诱导 、Ni NTA亲和柱纯化获得与硫氧还蛋白融合的重组蛋白Y35~C1．以Y35~C1重组蛋 白为抗原免疫BAIB／c小鼠，用杂交瘤细胞技术制备 了9株能够稳定传代并分泌抗 Y35~C1蛋 白单克 隆抗体的杂交瘤细胞株，分别制备它们的单抗腹水．9株单抗腹水的间接 EIISA效价在 10一～10 之 间．Y35~C1单克隆抗体的研制为该蛋白的亚细胞定位及功能研究，明确 Y35fiC1基 因在致病过程 中的 作用机理奠定了基础 ． 关 键 词 ：烟草曲茎病毒 ；原核表达 ：单克隆抗体 中图分类号 ：Q78；$432．4 文献标识码 ：A JIANGLei，wU Jianxiang，ZH()U Xue—ping(Instituteo／f3iotec’hno[og ，Collegeo，A~riculture Biotechnology，ZhejiangUniversit3-，Hangzhou310029，China) Prokaryoticexpression of geneofDNApsatelliteassociatedwith Tobaccocurly shootvirusand preparationofmonoclonalantibodiesagainstitsprotein．JournalofZhejiangUniversity (Agric． Life Sci．)，2008，34(2)：132136 Abstract：The卢(、 gentofDNA]3satelli*eassociatedwithTobac(0(urlyshootvirus(TbCSV)isolate Y35wasobtainedbyPeR andwasclonedintopET一32atoconstructrecombinantprokaryoticexpression vector，pET32aY358Cl Therecombinam vectorwasthen transformed into Escherichi“∞liBI21 (DE3)．Fusion protein trxA—Y35~C1wasinducedbyIPTG and purified with Ni。 NTA affinity chromatography Ninehybridomacelllinessecretingmonoclonalantibodies(MAbs)againstY35~C1 wereproducedbyfusingmousemyelomacells(SP2 0)withspleencellsfrom BAIB／cmiceimmunized withtherecombinantprotein．ThetitresofascitJcfluidsofthenineMAbsrangedfrom 10一 to 10- in indirectEIISA ThepreparationofMAbswouldbeusefulforsubcellularlocationandfunctiona1studv Ofpc1protein Keywords：Tobaec0curly skootvirus；prokaryoticexpression：monoclonalantibody