东北虎和华南虎源传染性鼻气管炎病毒的PCR检测和序列分析.pdf

野生动物 ChineseJournalofWildlife 2013，34 (3)：146—151 东北虎和华南虎源传染性鼻气管炎病毒的 PCR检测和序列分析 肖建雄 单 芬 黄嘉欣 陈 武 (1．广州动物园，广州，510070；2．华南农业大学兽医学院，广州，510642) 摘要：为了鉴定东北虎和华南虎疑似传染性鼻气管炎病料 中病毒的种类及进行流行病学分析 ，我们设计并合成 了4 对引物Fhvl、Fhv2、Fhv3、Fhv4用于扩增大小分别为 193bp，288bp，312bp和 1088bp的基因片段，同时对PCR 扩增产物进行纯化、克隆至 PMD18一TSimple载体、转化、酶切鉴定、测序及序列分析。结果显示设计并合成的4 对引物Fhv1、Fhv2、Fhv3、Fhv4均扩增出与 目的片段大小相符的明亮条带，分别约为200bp、290bp、310bp、 1100bp；对Fhv3进行单酶切鉴定，出现大小分别约为 160bp、150bp的2条条带；对 Fhv4进行测序及序列分析， 与GenBank 中已公布的猫传染性鼻气管炎病毒毒株 (序列号 ：FJ478159．2)序列相似性为 100％，与其他基因序列 相似性均较低。本研究首次发现东北虎和华南虎源猫传染性鼻气管炎病毒，可为虎类的饲养管理及疾病的防控提供 参考 ，为虎传染性鼻气管炎病毒的相关研究奠定基础。 关键词 ：东北虎；华南虎 ；猫传染性鼻气管炎病毒；PCR：鉴定 i序列分析 中图分类号：$858．9 文献标识码 ：A 文章编号：1000—0127 (2013)03—146—06 DiagnosisofRhinotracheitisVirusfrom SiberianTiger (Panthera玩 a／ta／ca)nadSouthChinaTiger (Pantherati~isamoyensis) byPCR andSequenceAnalysis XiaoJianxiong’ ShanFen HuangJiaxin ChenWu (1．GuangzhouZoo，Guangzhou，510070，China： 2．College V‘eterinaryMedicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou，510642，China) Abstract：WedetectedandidentifiedthetypeofvirusisolatedfromthemucosaltissuesofSiberianTiger (Pantheratigrisal— taica)andSouthChinaTiger(Pantheratigrisamoyensis)withclinicalmanifestationsofupperrespiratorydisease．Fourpairs ofconservedprimersFhvl，Fhv2，Fhv3andFhv4werepreparedforPCRamplificationof193bp，288bp，312bpand1088bp nucleotides．ThenthepurifiedPCR productswereclonedintoPMD18一TSimplevector，nadtrnasformedintoDH5ct．Finally， thecombinantplasmidswereextractedandidentifiedbyPCR andrestrictionendonucleases，andsequenceanalysisbasedon theFhv4 sequenceWflSperfomr edusingDNAStarsoftware．Allprimershadamplifiedclearstripsinagarosegelwith