中华蜜蜂王浆抗菌肽Acc-royalisin基因原核表达及多克隆抗体制备.pdf

浙江文学学报 (农业与生命科学版) 36(6)：609~614，2010 JournalofZhejiangUniversity(Agric． LifeSci．1 文章编 号 ：1008—9209(2010)06—0609—06 DOI：10．3785／j．issn．1008—9209．2010．06．003 中华蜜蜂王浆抗菌肽Acc-royalisin基因原核表达及多克隆抗体制备 丁关会 ，金 凤 ，沈立荣 ，陈正 贤 (浙江 大学 生物 系统工程 与食 品科 学学院 ，浙江 杭 州 310029) 摘 要 ：以舍 中华蜜蜂王浆抗菌肽 Acc-royalisin基 因的该蜂头部 cDNA文库质粒为模板 ，用 PCR方法扩 增 出其前体片段 ，并克隆入表达载体 pGEX-4T-2中，在大肠杆茵 BL21中与谷胱甘肽 s转移酶(GST)融合 进行表达 ，得到大小为 36ku，占细胞总蛋 白16．3 ，与GST多克隆抗体有免疫反应 的表达产物 ；用割胶 回收获得 的 目的蛋 白注射新西兰大 白兔 ，采集血清制备 多克隆抗体 ，该抗体与纯化 的 GST—Acc—royalisin 融合蛋 白经 EIISA 反应显示 出较高效价 ，经 Westernblot印迹分析获得特异性条带 ．这为进一步利用 免疫方法检测王浆的防腐性能和 Acc-royalisin生物制 品质量 ，以及蜜蜂抗病性奠定 了基础 ． 关 键 词 ：中华蜜蜂 ；蜂王浆 ；Acc~royalisin；原核表达 ；多克隆抗体 中图分类 号 ：Q78；S892 文献标 志码 ：A DING Mei—hui，JIN Feng，SHEN Li—rong，CHEN Zheng—xian(SchoolofBiosystemsEngineeringand FoodScience，ZhejiangUniversity，Hangzhou310029，China) ExpressionofAcc-royalisinfrom royaljellyofApisceranaceranainEscherichiacoliandpreparationof itspolyclonalantibody．JournalofZhejiangUniversity(Agric． LifeSci．)，2010，36(6)：609—614 Abstract：Thecodingregionofpre-pro-Acc-royalisinwasamplifiedbyPCR from cDNA libraryoftheChinese honeybee，Apisceranacerana head，andwasclonedintothevectorpGEX-4T-2forexpression inEscherichia coliBL21．Theexpressedfusionprotein，glutathioneGtransferase(GST)一pre-pro-Acc-royalisinof36kuwas obtained．whichwascross—reactedwithGST antibodyaccountingforupto 16．3 ofbacterialprotein．W ith theexpressedproductsretrievedfrom theSDS~PAGEgelsasantigento immunizeNew Zealandwhiterabbits， thepolyclonalantibodywasprepared．W iththepurifiedrecombinantGST-pre-prc~Acc-royalisinfusionprotein asantigen，thehightitersoftheantibodywasshownwithELISA analysis．Thespecificityoftheantibody againstthesameantigenswasthenconfirmedbyW esternblot．Thisstudyprovidesanew toolforthedetection ofantimicrobialofr