矮牵牛B-box型锌指蛋白基因PhBBX8的克隆与表达分析.doc

园艺学报，（）：– 2014411224372445 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2014–07–31；修回日期：2014–12–08 基金项目：国家自然科学基金项目；中央高校基本科研业务费专项基金项目（2013PY090）；教育部高等学校博士学科点专 项科研基金项目（20110146120040） 矮牵牛B-box型锌指蛋白基因 PhBBX8 的克隆与 表达分析 宁露云，李 蓓，李 佩，包满珠，张 蔚* （华中农业大学园艺林学学院，园艺植物生物学教育部重点实验室，武汉430070） 摘 要：利用矮牵牛（ Petunia hybrida ）基因表达谱芯片筛选出应答低温胁迫的相关基因，从中发现 1个B-box型锌指蛋白基因 PhBBX8 。通过RT-PCR克隆得到该基因的编码区序列（CDS），为1 242 bp， 预测其编码氨基酸413 aa，N端含有2个B-box盒，C端含有1个CCT结构域。系统进化树分析发现， PhBBX8与拟南芥AtBBX8等聚类为一支。利用半定量RT-PCR检测其在根、茎、叶和花中的表达特性， 结果表明该基因在花中表达量较高，其次为根，而在茎和叶中表达较弱；利用实时定量PCR检测了在低 温、干旱、ABA、MeJA、高盐和高渗胁迫处理下矮牵牛叶片中 PhBBX8 的诱导表达情况，结果表明， PhBBX8 表现出不同程度的上调，其中除干旱胁迫外，其他胁迫下上调倍数都较高，初步推测该基因与矮牵牛应 答低温等非生物逆境相关。 关键词：矮牵牛；B-box；锌指蛋白；非生物逆境；表达分析 中图分类号：S 681.9 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）12-2437-09 Cloning and Expression Analysis of a B-box-type Zinc-finger Protein Gene PhBBX8 in Petunia hybrida NING Lu-yun，LI Bei，LI Pei，BAO Man-zhu，and ZHANG Wei* （ Key Laboratory of Horticultural Plant Biology （ Ministry of Education ）， College of Horticulture Forestry Sciences ， Huazhong Agricultural University ， Wuhan 430070， China ） Abstract：Gene expression microarray of petunia was applied to select cold responsive gene，from which a B-box-type zinc-finger protein gene PhBBX8 was discovered. The full length of the coding region of PhBBX8 amplified by RT-PCR was 1 242 bp，and the product of PhBBX8 gene was predicted to consist of 413 amino acid residuals containing two B-box domains at the N-terminal and one CCT domain at the C-terminal. The phylogenetic tree analyses showed that PhBBX8 was clustered in the same branch with AtBBX8 in Arabidopsis . By semi-quantitative RT-PCR， PhBBX8 was found to express differentially in all the tissues detected，including root，stem，leaf and flower. Stress induced expression analysis by real-time quantitat