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第六章 种子生活力测定的原理和方法 一、种子生活力的概念和测定意义 二、种子生活力四唑染色测定 三、种子生活力的其他测定方法 一、种子生活力的概念和测定意义 2、测定种子生活力的意义 二、种子生活力四唑染色测定（TTC test or TZ test） 1、发展简史 2、原理 测定休眠种子的发芽潜力 测定收获后马上要播种的种子的发芽潜力 测定发芽缓慢的种子的发芽潜力 测定发芽末期未发芽种子的生活力 测定种子收获或加工期间损伤种子的生活力 解决发芽期间遇到的问题 查明种子贮藏期间劣变衰老程度 时间紧迫，调种时快速测定种子生活力 5、所需试剂 5、所需试剂 5、所需试剂 5、所需试剂 5、所需试剂 6、测定程序 6、测定程序 不需预湿和附加准备：如苜蓿种子 采用缓慢预湿后不需样品准备：如大豆种子等 穿刺或切开胚乳：小粒牧草等种子 沿胚纵切：水稻、玉米、和麦类等 近胚纵切：松柏和伞形科等植物种子 上半粒纵切：莴苣和其他菊科等植物种子 g) 切去种子基端：茜草科等植物种子 h) 斜切种子：菊科、十字花科和蔷薇科等 横切胚乳：黑麦草、羊茅等植物种子 剥去种皮：矮牵牛、茶籽和棉花等植物种子 剥开胚乳取出胚：杜仲等林木种子 横切胚轴和盾片：大麦和小麦等 从果实内取出胚：桃等 横切种子两端：山茱萸和胡颓子等 平切果种皮和胚乳，露出胚的构造：洋葱和菠菜等植物种子 （3）染色温度和时间 （4）鉴定前处理 ① 目标： 裸眼或在解剖镜下逐个鉴定，分清健壮组织，衰弱活组织，衰弱死组织和死亡组织并综合判断种子活力 水稻：凡是胚的主要构造染成正常鲜红色，或胚根尖端2/3不染色而其他部分正常染色的种子为有生活力种子。 大豆：凡是整个种子染成明亮红色，或仅胚根尖端1/3不染色，或子叶表面有小范围坏死，或子叶顶端1/3不染色，为有生活力种子。 （6）计算和结果表示 种子检验结果报告单 三、种子生活力的其他测定方法 甲烯兰法 溴麝香草酚兰法（BTB法） 红墨水染色法 软Ｘ射线造影技术 * * 1、种子生活力（seed viability）的概念 种子生活力是指种子发芽的潜在能力和种胚所具有的生命力。通常是指一批种子中具有生命力的种子数占种子总数的百分率。 第六章 种子生活力测定的原理和方法 能发芽的种子 暂时不能发芽而具有生命力的休眠种子 （1）休眠的种子必须进行生活力测定 （2）快速预测种子发芽能力 第六章 种子生活力测定的原理和方法 第六章 种子生活力测定的原理和方法 1942年由德国H. Lakon发明 1950年ISTA成立四唑测定技术委员会 1953年ISTA世界大会第一次将四唑测定列入国际种子检验规程 《四唑测定手册》（Handbook on Tetrazolium Test），Moore，1984年，650多个属和种 1995年我国将四唑测定列入农作物种子检验规程 无色的的三苯基四氮唑被种子吸收后，在胚部活细胞中脱氢酶的作用下，还原成为红色的、稳定、不扩散的三苯基甲 ，这样，就可根据染色的部位和深浅来区分种子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。 第六章 种子生活力测定的原理和方法 3、特点 原理可靠 结果准确(与标准发芽率误差一般不超过3-5%) 不受休眠限制 简便快速 6-24h Vitascope 20-30min 成本低廉 第六章 种子生活力测定的原理和方法 第六章 种子生活力测定的原理和方法 4、适应范围 第六章 种子生活力测定的原理和方法 四氮唑：2,3,5-氯（溴）化三苯基四氮唑 （2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride or Bromide） 简称：四唑或红四唑 缩写：TTC， TTB，TZ △ 理化性质 白色或淡黄色的粉剂，熔点243℃； 当温度达到245℃时就会分解，易溶于水，具有微毒； 遇到直射光线时会被还原成粉红色， 所以该试剂需用棕色瓶装盛，并用黑纸外面包装。 已配好的四唑溶液应装入棕色玻璃瓶里，存放在暗处。 在进行种子染色时，也许将其放在暗处和弱光处进行。 第六章 种子生活力测定的原理和方法 △ 测定方法 建议使用 0.1%～1.0% 四唑盐的水溶液 切开的种子用 0.1%～0.5% 浓度的四唑溶液； 整个胚、整粒种子或斜切、横切或穿刺的种子需用 1.0% 浓度的四唑溶液； 种子染色时间与四唑溶液浓度有关。 浓度增加，染色反应所需时间也随之缩短，从染色效果看，以较低浓度为宜； 测定时，要求四唑溶液的 ph 值在 6 ～7 范围之内。 第六章 种子生活力测定的原理和方法 △ 配制方法 称取 1 g 四唑粉剂溶解于 100 ml 磷酸缓冲溶液中，即配成 1.0% 四唑溶液； 称取