解淀粉芽胞杆菌X030抑菌和抗肿瘤活性分析.pdf

密级 学校代码 10542 学号 201202141168 解淀粉芽胞杆菌X030抑菌与抗肿瘤 活性研究 Antibacterialandanti-tumor activity studiesofBacillus 研究生姓名 何浩 指导教师姓名、职称 丁学知教授 学 科 专 业 微生物学 研 究 方 向 微生物新药物 湖南师范大学学位评定委员会办公室 --o一五年六月 万方数据 摘要 芽胞杆菌分布广泛，易分离培养，生长周期短，繁殖速度快， 在生长繁殖过程中产生的活性物具有抑菌、杀虫和抗肿瘤等生物功 能。从全国各地采集的72份土样中筛选出339株芽胞杆菌，经抑 菌与抗肿瘤活性检测，结合形态观察、生理生化特征和16SrRNA 基因Blast同源序列比对分析，确定了一株高毒力解淀粉芽胞杆菌 新菌株，命名为Bacillus amyloliquefaciens NO：M 藏号为CCTCC 2014159)；通过多步分离纯化得到抑菌活 性多肽和抗肿瘤活性小分子。 BaX030发酵培养48 1290 Infinity)分析，高效液 10)分离，超高效液相色谱(Agilent 1260 Infinity)制备，得到纯的抑菌组分B2和抗肿 相色谱(Agilent 82．09 瘤活性物BAHl，LC．MS／MS鉴定结果显示B2分子量大小为1 Da。 Da，BAHl分子量大小为122．14 经不同温度和pH处理上清液，用滤纸片法对金黄色葡萄球菌 与白色念珠菌等七种病菌进行抑菌实验；对峙培养法对辣椒尖胞炭 疽病菌与枇杷炭疽病菌等六种植物病原真菌进行拮抗实验，结果显 示：上清液对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及辣椒尖胞炭疽病菌、 枇杷炭疽病菌等具有较好的抑制效果；且抑菌活性在常温、强酸和 中性条件下最好，高温与强碱处理活性降低；BaX030与辣椒尖胞 炭疽病菌对峙培养发现，随着培养时间推移孢子出现变黑、变小、 变少、内含物释放和裂解现象；与植物病原菌对峙培养十天，形成 环状包围圈，辣椒尖胞炭疽病菌与枇杷炭疽病菌菌丝变黑基本停止 生长。 万方数据 BAHl(8 胞(m胍C)。MTT数据显示，三种肿瘤细胞增殖受到明显抑制， 且具有浓度依赖性，对HUVEC细胞增殖影响相对肿瘤细胞较小。 Alexa 倒置显微镜观察细胞形态；同时用Hochest33342、tubulin Fluor TrackerRed 488和Mito CMVRos对细胞进行免疫荧光染色， 激光共聚焦显微镜(Confocal)观察亚细胞结构，结果显示：处理