生物化学—蛋白质.docVIP

氨基酸性质与密码子的关系： 9种氨基酸有2个密码子 5种氨基酸有4个密码子 3种氨基酸有6个密码子 1种氨基酸有3个密码子 2种氨基酸有1个密码子 第二个字母为U的密码子对应的是疏水性氨基酸 第二个字母为C的密码子对应的是小或较小氨基酸 第二个字母为A或G的密码子对应的是极性氨基酸 氨基酸个性了解得越深刻，在根据一级结构预测蛋白质的立体结构时，考虑问题也就越全面，预测的正确性也就越高。 维持空间构象的因素蛋白质的时空特性 特征结构：溶酶体酶分子中的甘露糖-6-磷酸，酶原及酶原激活，同形异位突变 （2）蛋白质的时间性 肿瘤发生时出现胚胎分化早期所出现的Pr，如肝癌出现的甲胎蛋白。 细胞周期不同时期蛋白质表达的调控是又一个重要研究领域。 2.分离纯化依据的性质分离纯化的一般步骤 种子材料应先去壳甚至去种皮以免受单宁等物质的污染，油料种子最好先用低沸 点的有机溶剂如乙醚等脱脂。 然后根据不同的情况，选择适当的方法，将组织和细胞破碎。动物组织和细胞可用电动捣碎机或匀浆器破碎或用超声波处理破碎。 (1)选材 (2)破碎 (3)混合物的分离 （二）粗分级分离 （1）盐析。（2）等电点沉淀。（3）有机溶剂分级分离。（4）超滤。（5）凝胶过滤。（6)冷冻干燥 （三）细分级分离 一般使用层析法包括凝胶过滤，离子交换层析，吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法，包括区带电泳、等电聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一 般规模较小，但分辨率很高。 结晶是蛋白质分离纯化的最后步骤。尽管结晶并不能保证蛋白质一定是均一的，但只有某种蛋白质在溶液中数量上占优势时才能形成结晶。结晶过程本身也伴随着一定程度的纯化，而重结晶又可除去少量夹杂的蛋白质。由于结晶中从未发现过变性蛋白质，因此蛋白质的结晶不仅是纯度的一个标志，也是断定制品处于天然状态的有力指标。 4.依据分子大小、电荷不同的纯化方法1)透析和超滤 透析 —— 只用于除盐类和小分子杂质 透析是利用蛋白质等大分子不能通过半透膜的性质 ，使蛋白质和其它小分子物 质如无机盐单糖等分开。 超滤 —— 除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质 (2)密度梯度离心法 生物大分子及颗粒的沉降不仅决定于它的大小，而且也取决于 它的密度。颗粒在具有密度梯度 的介质中离心时，质量和密度大 的颗粒沉降的快，并且每种蛋白 质颗粒沉降到与自身密度相等的 介质密度梯度时，即停止不前， 最后各自在离心管中被分离成独 立的区带。分成区带的样品可以 在管底刺一个小孔逐滴放出，分步收集。 (3)凝胶层析 是分子大小分离pr混合物的有效方法 二、根据电荷不同的纯化方法 (1)电泳：不同的pr分子由于其净电荷量和分子大小的不同，在相同条件下电泳，泳动速度不同，彼此得到分离。由于pr具有两性电离性质，当pr溶液pH值大于等电点时，该pr带负电荷，在电场中向正极移动，反之则带正电荷，在电场中向负极移动，只有pr溶液的pH值在pr等电点时静电荷为零，在电场中才不向任何一极移动。(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳（3）毛细管电泳（4）等电聚焦：在一定抗对流介质（如凝胶）中加入两性电解质载体(Ampholyte,是一种多氨基多羧基的混合物，由异构物和同系物组成，其pK和pI值各自相异却又相近），当直流电通过时，便形成一个由阳极到阴极pH值逐步上升的梯度。两性化合物在此电泳过程中，就被浓集在与其pI相等的pH区域，从而使不同化合物能按其各自等电点得到分离。（5）聚焦层析：该法是在等电点聚焦方法基础上发展起来的，其分离纯化蛋白质的依据是等电点的差异和离子交换行为。蛋白质按其等电点在pH梯度环境中进行排列的过程叫做聚焦效应。pH梯度的形成(由多缓冲剂和多缓冲交换剂形成)是聚焦效应的先决条件，如果一种蛋白质加到已形成pH梯度的层析柱上时,由于洗脱液的连续流动，蛋白质将迅速地迁移到与它等电点相同的pH处。从此位置开始，该蛋白质将以缓慢的速度进行吸附、解吸附，直到在等电点pH时被洗出。在聚焦层析过程中,一种样品分次加入时，只要先加入者尚未洗出,并且有一定的时间进行聚焦,剩余样品还可以加到柱上,其聚焦过程都能顺利完成。（6） 离子交换层析：离子交换柱层析是一种利用离子交换树脂作为介质，即离子交换剂的层析法。离子交换树脂是人工合成的，具有酸性基团或碱性基团，并具有网状结构的高聚物。阳离子交换树脂含有酸性基团，阴离子交换树脂含有碱性基团。由于pr具有两性电离性质，当pr溶液pH值大于等电点时，该pr带负电荷，可结合于阴离子交换剂上；当pr溶液pH值小于等电点时，该pr带正电荷，可结合于阳离子交换剂上。即使带相同电荷的pr分子，由于所带电荷量不同，与离子交换剂的亲和力也不同，利用这种差异可以分离pr复合物。 5.结构与功能的关系（一级结构：细胞色素镰刀型细胞贫血症;高级结