人胚食管上皮细胞永生化及恶性转化过程中的染色体异常分析.pdfVIP

目 录 缩略语释义………………………………………………………3 中文摘要…………………………………………………………4 英文摘要…………………………………………………………6 前 言…………………………………………………………9 实验一 材料与方法………………………………………………………10 结 果…………………………………………………..…14 实验二 材料与方法………………………………………………………18 结 果……………………………………………………20 讨 论………………………………………………………21 结 论……………………………………………………27 展 望…………………………………………………..…..28 参考文献…………………………………………………………29 致 谢………………………………………………………32 附 图………………………………………………………33 综 述 一………………………………………………………39 综 述 二………………………………………………………47 ２ 万方数据 缩略语释义 HPV 人乳头瘤病毒 H5E973 cell line HPV18 永生化人胚食管上皮细胞株 TPA （12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate ） 12 葵豆寇 PBS 磷酸盐缓冲液 DAB 二氨基联苯胺 EDTA 乙二胺四乙酸二钠 ３ 万方数据 人胚食管上皮细胞永生化及其恶性转化过程中的 染色体异常研究 （中文摘要） 背景与目的：现已证实几乎所有的人体恶性肿瘤都与染色体异常有关。因此，检 测食管癌的染色体异常有助于阐明食管癌的癌变机制。HPV18 E6E7 基因转染人胚 食管上皮细胞建立的永生化细胞株H5E973 具有恶性变趋向，其61 代细胞部分已 恶性转化。H5E973 细胞株和在H5E973 培养传代后加入TPA 诱导其恶性转化而 建立的瘤细胞株LTPA 为体外研究食管癌癌变机制提供了理想模型。本课题以这2 个细胞株为实验对象，研究食管上皮细胞永生化及其恶性转化过程中的染色体变 化规律，为进一步研究食管癌的分子细胞遗传学异常提供有价值信息。 方法：体外传代培养H5E973 和LTPA 细胞，制备其中期染色体，用胰酶-Giemsa 法进行G 显带。分析H5E973 26 、43 、89 代和LTPA 63 代的染色体众数变化；对 H5E973 26 、89 代和LTPA 63 代进行G 显带核型分析。此外，利用免疫组化和图 象分析技术检测H5E97320 、85 代及LTPA74 代细胞的HPV18 E6 、E7 蛋白的表达 情况。 结果：H5E973 26 代、43 代、89 代众数分别为56~62、58~63、61~64，LTPA 63 代众数为59~64 。H5E973 和LTPA 细胞主要以超二倍体，尤其是亚三倍体为主。 伴随传代次数增加，H5E973 细胞众数右移，且亚三倍体也呈增多趋势。12、14、 17 和20 号染色体数目增加