流式细胞术在基础医学研究中的应用-2011讲义节选.docVIP

流式细胞术 在基础医学研究中的应用 讲义节选 郑州大学基础医学院病理生理教研室 2011.9 目 录 前言……………………………………………………………………………………..……… 流式细胞术在基础医学研究中的地位………………………………………………..……… 流式细胞术的发展简史………………………………………………………………..……… 流式细胞仪的结构和工作原理简介……………………………………………………..…… 流式细胞术结果的判读…………………………………………………………………..…… 基础医学研究中运用流式细胞术的流程………………………………………………… 流式细胞术使用中样本处理程序和要点…………………………………………………… 流式细胞术应用之1 ——细胞周期分析………………………………………………….. 流式细胞术应用之2 ——细胞凋亡分析………………………………………………….. 流式细胞术应用之3 ——细胞增殖分析………………………………………………….. 流式细胞术应用之4 ——细胞杀伤分析………………………………………………….. 流式细胞术应用之5 ——细胞表面标志物分析………………………………………….. 流式细胞术应用之6 ——细胞分泌物分析…………………………………….…………. 流式细胞术相关信息……………………………………………………………….……….. 作业题（必做题） ___________________________________________________________________________ 主讲：黄幼田 电话 Email: hytbingsheng@前言 （一）开课说明 病理生理学研究生课程中涉及大量的现代医学基础研究的成果、现状和相关技术，因此有必要将一些现代医学基础研究的技术介绍给同学们。我们选择了流式细胞术这一复合型技术的课程，以期望给同学们开拓新的视野。 现今网络上可以查到许多流式细胞术临床应用的资料、流式细胞仪操作资料。但如何从基础研究、课题应用设计角度来介绍的资料较少。本课程侧重基础研究、应用设计角度来介绍流式细胞术。 本讲义内容大多来自网络、文献、书籍，便于学生们集中学习。也有相当一部分内容来自于实际工作的经验总结，期望起到前车之鉴的作用。 由于流式细胞术自身发展，概念与方法也在不断推陈出新，以及个人经验与认识的局限，本讲义错误之处，敬请修正。 （二）流式细胞术概念 1、流式细胞术（Flow cytometry，FCM） 是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术。 2、流式细胞仪(Flow cytometer，FCM) 是集光电子物理，光电测量，计算机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。是快速、精确地测量通过检测区液流中的各种粒子的仪器。 3、流式细胞术所用试剂 ⑴ 荧光素标记的抗体。如CD3-FITC, CD4-PE,CD8-cy5 ⑵ 荧光染料。如PI(碘化丙啶), AO(丫叮橙) 4、市售试剂中荧光素与萤光素的区别 5、常用荧光素：（488nm激发光条件下） 名称 简写 被激发的荧光波长 颜色 异硫氰酸荧光素 FITC 525 绿色 藻红蛋白 PE 575 橙红 碘化丙啶 PI 630 橙红 叶绿素蛋白 PerCP 675 深红 化青素 CY5 675 深红  流式细胞术在基础医学研究中的地位(略) 三、流式细胞术的发展简史(略) 四、流式细胞仪的结构和工作原理简介 （一）结构和原理(略) （二）流式细胞仪的硬件结构和掌握要点 （1）液流系统：上样速度（低中高三挡）、上样针孔径（低于100um）、鞘液消耗、与样品质与量的关系。 （2）光路系统：激光管个数与照射波长(488nm 630nm), 荧光通道系统的个数与常用指标数量。 （3）常用指标的解释（以 BD FACSCalibur为例） FSC:前向角——细胞或颗粒物的大小 488nm SSC:侧向角——细胞内容物的多少 488nm FL1: 530绿色荧光信号 530/30nm FITC FL2: 550 橙色荧光信号 560/40nm PE FL3: 670 红色荧光信号 670/LP nm perCP FL2H: 550 橙色荧光信号强度