茶树鸟氨酸转氨酶基因Csδ-OAT的克隆与表达分析.doc

园艺学报，（）：– 2014411224652473 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2014–07–11；修回日期：2014–09–25 基金项目：国家自然科学基金项目31000315）；国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-23） 的茶树鸟氨酸转氨酶基因 Csδ-OAT 克隆与表达 分析 王伟东，疏再发，杜昱林，黎星辉，王玉花* （南京农业大学茶叶科学研究所，南京 210095） 摘 要：根据已知鸟氨酸转氨酶（δ-OAT）的保守序列设计简并引物，并利用RT-PCR和RACE技术 从‘迎霜’茶树中克隆获得鸟氨酸转氨酶基因，命名为 Csδ-OAT ，其GenBank登录号为KJ641844。该基 因cDNA全长为1 865 bp，编码473个氨基酸，理论等电点为7.19，推测分子量为52.3 kD。序列比对分 析结果表明，Csδ-OAT主要功能域保守性较高，存在典型的PLP结合位点；系统进化树分析显示，Csδ-OAT 的进化符合传统的生物学分类，与其他双子叶植物具有同一起源。qRT-PCR分析结果表明， Csδ-OAT 基因 的表达存在明显的组织特异性，在花中表达最高，其次是叶片，而在其他组织器官中表达较低。此外， Csδ-OAT 基因受高盐、低温、干旱、ABA和氧化胁迫处理的诱导，表明其参与了茶树体内各种非生物胁 迫响应的过程。 关键词：茶树；鸟氨酸转氨酶； Csδ-OAT ；克隆；表达分析 中图分类号：S 571.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）12-2465-09 Cloning and Expression Analysis of Ornithine-δ-aminotransferase Gene Csδ-OAT in Camellia sinensis WANG Wei-dong，SHU Zai-fa，DU Yu-lin，LI Xing-hui，and WANG Yu-hua* （ Tea Research Institute ， Nanjing Agricultural University ， Nanjing 210095， China ） Abstract：Degenerate primers were designed according to the known conserved regions of Ornithine- δ-aminotransferase gene（ δ-OAT ），and the complete cDNA sequence of δ-OAT was firstly cloned from Camellia sinensis using RT-PCR and RACE technologies. The cDNA was termed Csδ-OAT （GenBank accession KJ641844）and its full-length was 1 865 bp encoding a protein of 473 amino acids. The molecular weight of Csδ-OAT was 52.3 kD and theoretical isoelectric point was 7.19. The BLAST results showed that the functional domain of Csδ-OAT is highly conserved with a typical PLP binding site. Phylogenetic analysis of plant δ-OAT reveals that the evolution of Csδ-OAT corresponds with traditional biological classification. QRT-PCR analysis results showed that the expression of Csδ-OAT has obvious tissue specificity，and it was higher in flower，followed by leaves，b