西南科技创新基金项目香菇疏水蛋白的基因克隆和功能分析申报书.doc

项目编号 西南林业大学科技创新基金 项 目 申 报 书 项 目 名 称： 香菇疏水蛋白的基因克隆和功能分析 项目负责人： XXX 项 目 成 员： XXX 指 导 教 师： XXX 所在院系部： 生命科学学院 联 系 电 话： 起 止 年 月： 2014年11月-2015年11月 填 报 日 期： 2014年09月25日 项目类别(自 然 科 学 类(本科生 □ 个人项目 □ 哲学社会科学类□ 科技发明制作 □ 研究生 ( 集体项目 一、本项目的依据和意义（包括科学意义和应用前景，学术思想，立论依据，创新性，主要参考文献目录和出处） 疏水蛋白的发现及分布: 疏水蛋白是一类具有强表面活性的分泌型小分子量蛋白质。Rosenbet$和Kjelieberg(19-6)在研究细菌与寄主吸附机理时提出的，意指覆盖在微生物细胞表面的任何疏水物质(Hydrophobic substances)。Wessels研究小组发现裂褶苗(Schb.ophytium commune)子实体和气生菌丝形成时。某些基因及其相应的cDNA序列可以编码约100个氨基酸的小蛋白。它含有8个半胱氨酸残基和一段分泌性的信号肽，而后这一类物质统称为疏水蛋白(Hydrophobin) 。 疏水蛋白广泛存在于各类群的真菌中，是由丝状真菌分泌的具有特殊性质的蛋白质。在真菌的生长和繁殖中起着非常重要的作用。到目前为止已知在20种真菌中发现其存在，包括子囊菌、担子菌和接台菌等。而疏水蛋白普遍存在于真菌的气生菌丝、侵染机构、或子实体表面，且高丰度表达。由于疏水蛋白具有不同寻常的生化性质，很难用常规的蛋白分析方法检测到其存在，直到最近几年通过鉴定相应的基因才发现它们，由于所有疏水蛋白基因都编码一段信号肽，通过免疫定位、蛋白提纯及N一末端氨基酸序列分析可以确定它们是疏水蛋白。 疏水蛋白的性质、功能及理论依据: 生化分析表明I和Ⅱ型的琉水蛋白具有明显不同的性质，对裂褶菌 Schizophyllum commune 的琉水蛋白研究指出I型的疏水蛋白可以从真菌细胞壁中以复合体形式分离提纯。该复合体不溶于SDS 而溶于甲酸或过甲酸。过甲酸可以把半胱氨酸氧化成碘基丙氨酸，从而打断了二硫键，使其在提取过程不永远丧失了蛋白二结构。采用这一方法可以证明其氨基酸序列与在研究双棱阶段所表达的疏水蛋白的基因序列是一致的。继而Wessels研究小组发现采用砖的三氟乙酸(Trifluoroaeetic acid．TFA)可以小范围地打破疏水交互作用。有效地溶解疏水蛋白的单体，保证了疏水蛋白完整性和生物学活性。通过这一方法，Wessels和他的同事们测定了许多真菌的疏水蛋白性质 并发现疏水蛋白可以进行表面间的自我组装。由于Takaj及其同事的基于对植物病原真菌 Ophiostoma ulmi的疏水蛋白ceralo-ul-min(C—U)的研究，发现C—U为Ⅱ型的疏水蛋白。虽不溶于SDS，但能溶于60％的己醇，其多聚物与SC3相似可以形成纤丝状或杆状结构，但很不稳定，且C—U具有植物毒性。 疏水蛋白中氨基酸的排列方式也具有显著的不同，通过对它的半胱氨基酸残基及其它氨基酸残摹序列比较，就会产生不同的疏水形式，Wessels把它们分为I和Ⅱ型的疏水蛋白。I型的疏水蛋白具有两个功能域，以二硫键为中心形成为四个环”状结构，第二个环与第四个环太小差异很太。疏水蛋白Sc3、rodA和dewA的第二环比疏水蛋白MPG1太得多。相比较Ⅱ型疏水蛋白的第二和第四环中疏水性明显占优势。含有大量的氨基酸残基(M、I、L和V)，并环绕着无极性氨基酸残基(G和A)或对疏承性没有影响氨基酸残基(T和Y) 疏承蛋白单体因此折叠成为二亲性的形态结构，尽管环状结构还包含其它二级结构。 疏水蛋白的多聚体膜有非常高的稳定性，还高但其单体的稳定性要差的多。完整的疏水蛋白具有至少六种基本生理功能：帮助真菌克服气液屏障形成气生结构。赋予真菌菌丝以疏水性。 粘附真菌菌丝到固体疏水表面。使细胞壁更完整。保护真菌细胞抵抗恶劣环境。此外还可以作为毒素和诱导物、促进孢子扩散、形成亲水环