3章发酵工艺条件-27120923.ppt

1．斜面培养基 斜面培养基主要是用于： 1 生长繁殖培养基，包括细菌、酵母等的斜面培养基以及霉菌、放线菌生孢子培养基或麸皮培养基等。 2 菌种保藏培养基； 2.种子培养基 包括：摇瓶种子和小罐种子培养基。 目的：培养种子 1.促进生长，增加细胞数量使其大量繁殖； 2.必须培养出强壮、健康、活性强的“种子”。 3.发酵培养基 地位：发酵生产中最主要的培养基，不仅采用大量原材料，也是生产能否成功的关键。 作用：最大限度的获得目的产物，因此必需根据菌体的生长规律和产物合成特点设计培养基。 3.发酵培养基设计原则 1.提供必要的营养成分; 2.利于减少培养基原料单耗，提高单位营养物质的转化率。 3.利于提高产物浓度，以提高单位容积的生产能力。 4.利于提高产物合成速度，缩短发酵周期。 5.减少副产物的形成，便于分离纯化。 6.原料价格低廉。 7.原料尽量不对搅拌和通气产生影响，利于O2的利用率 8.利于产品的分离纯化，尽量减少产生“三废”物质。 1 前体物质 2 添加促进剂（诱导物） 工业用微生物酶多数为诱导酶，如蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等。 诱导物的存在能大大强化诱导酶的生物合成。 酶的正常底物或底物类似物都可作为诱导物。 在各种微生物酶的发酵培养基中必须加入诱导物，例如淀粉、糊精或麦芽糖是淀粉酶或糖化酶的诱导物。只有添加这些物质的培养基，才能获得高产。 3 注意阻遏物或抑制剂的影响 培养基中存在反馈阻遏物能影响酶的合成，降低发酵产量。 4 金属离子的影响 有些种类的发酵生产对金属离子相当敏感，因为有些金属离子是中间代谢酶抑制剂或激活剂。 二、工业生产中培养基组成 碳素化合物 氮素化合物 水 微量元素 无机盐类 生长因子 碳源物质 单双糖：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖； 多糖：淀粉、纤维素、半纤维素、甲壳质和果胶质等，其中淀粉是大多数微生物都能利用的碳源。 有机酸：柠檬酸、反丁烯二酸、琥珀酸、苹果酸、丙酮酸、酒石酸等。 醇类：甘露醇、甘油、低浓度乙醇。 低级脂肪酸：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸等低级脂肪酸都可用作碳源。 高级脂肪酸：油酸和亚油酸等高级脂肪酸可被放线菌和真菌作为碳源和能源利用，低浓度的高级脂肪酸可刺激细菌生长，但浓度较高时往往有毒害作用。 正烷烃： 葡萄糖： 优点：是最易利用的糖，并且作为加速微生物生长的一种有效的糖。 缺点：过多葡萄糖会加速菌体的呼吸，以致培养基中的溶解氧不能满足需要。 油和脂肪： 在微生物分泌的脂肪酶作用下水解为甘油和脂肪酸，在溶解氧的参与下，氧化成水和CO2。因此用脂肪作碳源时需比糖代谢供给更多的氧。 2 氮素化合物 氮的来源可分为无机氮和有机氮。 有机氮源：花生饼粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母膏、鱼粉、蚕蛹粉、尿素、废菌丝体和酒糟等。 它们在微生物分泌的蛋白酶作用下，水解成氨基酸，被菌体进一步分解代谢。 实验室中常用蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等作为氮源，工业生产上常用硫酸铵、尿素、氨水、豆饼粉、花生饼粉、麸皮等原料作氮源。 3 微量元素 无机盐类 无机盐包括大量元素和微量元素，是依据微生物对它们需要量的大小划分。 大量元素：P、S、Mg、K、Ca、Fe等； 微量元素：Fe、Cu、Mn、Zn、Mo、Co等。 当盐浓度太高时，对微生物生长有抑制作用，而在较低浓度时却能刺激生长。 一般在复合培养基中由于加入许多动植物原料等都含有微量元素。 4 生长因子 广义说，凡是微生物生长不可缺少的微量有机物质都称为生长因子 又称生长素 。包括维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等； 狭义说，生长素仅指维生素。 与微生物有关的维生素主要是B族维生素，是各种酶的活性基团的组成部分。 三、发酵培养基的确定 （1）首先，做好调查研究工作，了解菌种的来源、生活习惯、生理生化特性和一般的营养要求。 （2）其次，对生产菌种的培养条件，生物合成的代谢途径，代谢产物的化学性质、分子结构、一般提炼方法和产品质量要求等也需要有所了解. （3）最好先选择一种较好的化学合成培养基做基础，开始时先做一些摇瓶试验;然后进一步做小型发酵罐培养，摸索菌种对各种主要有机碳源和氮源的利用情况和产生代谢产物的能力。 注意培养过程中的pH变化，观察适于菌种生长繁殖和适于代谢产物形成的两种不同pH。其次再确定各种重要的金属和非金属离子对发酵的影响。 （5）根据经济效益选择培基原料 碳源的代用方向：寻找植物淀粉、纤维水解物，以废糖蜜代替淀粉、糊精和葡萄糖，以工业葡萄糖代替食用葡萄糖。同时，使用稀薄的培养基，适当减少碳氮配比。 有机氮源代替：以黄豆饼粉、花生饼粉、食用蛋白胨和酵母粉等含有丰富蛋白质的原料。代用的原料可以是棉籽饼粉、玉米浆、蚕蛹粉、杂鱼粉或麸汁、饲料酵母、石油酵母、骨胶、酒糟，及各种食品工业