大肠菌群检测操作规范培训.ppt

大肠菌群检测操作规范培训 质量管理部 目录 一、细菌介绍 二、大肠杆菌生物学特性 三、大肠杆菌检测仪器、设备 四、检测培养基及试剂 五、检测前培养基准备 六、接种培养 七、MPN单位介绍 八、检测注意事项 一、细菌介绍 细菌是单细胞原核微生物，个体微小（细胞直径约0.5μm, 0.5-5μm），结构简单，以二等分裂方式繁殖。在自然界中，细菌分布最广、数量最多。 1、细菌的形态 细菌个体微小、形态各异 球菌 杆菌 弧菌与弯曲菌 螺旋菌及螺旋体 不规则形 2、细菌的结构 细菌的基本结构包括：细胞壁、 细胞膜、间体、细胞浆、核糖体、细胞质。 细菌的附属结构包括：质粒、荚膜、鞭毛、菌毛和芽胞。 3、细菌的繁殖 细菌最普遍、最主要的繁殖方式：二分分裂繁殖。在分裂前先延长菌体，染色体复制为二，然后垂直于长轴分裂，细胞赤道附近的细胞质膜凹陷生长，直至形成横隔膜，同时形成横隔壁，这样便产生两个子细胞。 4、细菌的菌落 单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团－菌落。 二、大肠杆菌生物学特性 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。主要包括埃希氏菌、柠檬酸细菌、肠杆菌、克雷伯氏菌等，均属于肠杆菌。 1、大肠杆菌平板菌落照片 2、大肠杆菌革兰氏染色照片 3、大肠杆菌微菌落照片 4、大肠杆菌透射电镜照片 5、大肠杆菌扫描电镜照片 6、大肠杆菌分裂照片 三、检测仪器、设备 冰箱：0～4℃ 恒温培养箱：36±1℃ 恒温水浴锅：46±1℃ 微生物显微镜 四、检测培养基及试剂 乳糖胆盐发酵管 伊红美蓝琼脂 乳糖发酵管 革兰氏染色液 生理盐水 五、检测前培养基准备 检查预先经过灭菌处理的乳糖胆盐发酵培养基小导管内是否有气体。 按产品品种将培养基分别放在试管架内，同时将9ml 0.85%灭菌盐水管也放入相应的试管架内。 六、接种培养 （一）酸牛奶系列产品 酸牛奶系列产品接种单料乳糖胆盐发酵培养基9支管，分别接种样品量为1ml (原浓度)3支，0.1ml (10-1浓度)3支，0.01ml (10-2浓度)3支。 1、 1ml接种培养 在无菌条件下，用1ml灭菌吸管吸取1ml样品试液于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:10的稀释液；同时分别吸取1ml样品试液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 2、 0.1ml接种培养 另换1根1ml灭菌移液管吸取1:10的稀释液1ml于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:100的稀释液；同时分别吸取1ml 1:10稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 3、 0.01ml接种培养 另换1根1ml灭菌移液管分别吸取1ml 1:100稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 4、接种过程操作录像检测\单料大肠检测.MPG 5、接种后培养 将接种完的试管连同试管架一起置于36±1℃的培养箱内培养24±2h，观察乳糖胆盐发酵管的变化情况。 6、结果查询并记录 若所有乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，则报告大肠菌群阴性。 若有产酸产气，则要做证实试验。 （二）活性乳酸菌饮料系列产品 活性乳酸菌饮料系列产品接种双料乳糖胆盐发酵培养基3支管，单料乳糖胆盐发酵培养基6支，分别接种样品量为10ml 3支，1ml 3支，0.1ml 3支。 1、 10ml接种培养 在无菌条件下，用1ml灭菌吸管吸取1ml样品试液于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:10的稀释液；同时用10ml灭菌吸管分别吸取10ml样品试液于3支双料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 2、 1ml接种培养 另用1ml灭菌移液管分别吸取1ml 样品试液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 3、 0.1ml接种培养 另换1根1ml灭菌移液管分别吸取1ml 1:10稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。 4、接种过程操作录像检测\双料大肠检测.MPG 5、接种后培养 将接种完的试管连同试管架一起置于36±1℃的培养箱内培养24±2h，观察乳糖胆盐发酵管的变化情况。 6、结果查询并记录 若所有乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，则报告大肠菌群阴性。 若有产酸产气，则要做证实试验。 （三）证实试验 1、伊红美蓝琼脂平板分离 将产酸产气乳糖胆盐发酵管内的培养物分别接种于伊红美兰琼脂平板(划线分离)，置于36±1℃的培养箱内培养24±2h。 接种和分离工具 平板分离画线法 （四）乳糖发酵试验 挑取可疑菌落进行革兰氏染色后接种乳糖发酵培养基，置于36±1℃的培养箱内培养24±2h，观察产气情