海南罗非鱼致病性维氏气单胞菌分离鉴定及药敏特性研究.pdfVIP

第 34卷第 1O期 水 产 科 学 Vo1．34No．10 2015年 1O月 FISHERIES SCIENCE 0ct．2O15 海南罗非鱼致病性维氏气单胞菌分离鉴定 及药敏特性研究 李 聪 ，蔡 岩 ，周永灿 ，袁 卫 一，曹 可 一， 刘海天 ，谢珍玉 ，郭伟 良 ，王世锋 (1．热带生物资源可持续利用省部共建国家重点实验室培育基地 ，海南 海 口570100； 2．海南大学 海洋学院，海南省热带水生生物技术重点实验室 ，海南 海 口570100) 摘 要 ：2014年 3—5月海南省罗非鱼主养区多个养殖场发生爆发性疾病 ，从患病尼罗罗非鱼不 同组 织 中分离获得 12株优势菌。经人工回归感染试验 ，从肝脏和脑中分离获得 的HN一@03和 HN—B-02菌 株具较强的致病力，HN—G-03和 HN—B-02菌株对罗非鱼的的半致死密度分别为 7．12×10cfu／尾和 1．32×10cfu／尾 。经 16SrRNA和 gyrB基 因序列分析 ，同时结合细菌 的形态学特征 、生理生化特征 ， 菌株 HN—G-03和 HN一13-02分别被鉴定为维氏气单胞菌的维 氏生物型和温和生物型。体外药物药敏 试验结果显示 ，两株菌均对左氧氟沙星、强力霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、庆大霉素等 5种药物高度敏 感 ，对呋喃妥因等 3种药物 中度敏感 ，对青霉素等 12种药物较强耐药 。 关键词 ：罗非鱼 ；维 氏气单胞菌 ；16SrRNA；gyrB基 因；药物敏感性 中图分类号 ：S917．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：100311ll(2015)10—0640—07 罗非鱼是我国主要淡水养殖品种之一 ，养殖产 1 材料与方法 量 占世界总产量的 5O 以上n]，海南因 自然环境适 宜 ，水质优 良，是我 国罗非鱼主要养殖 区域之一 。 1．1 试验材料 然而 ，随着罗非鱼养殖面积 的扩大和产量的提高 ， 患病罗非鱼及本试验所用罗非鱼均为吉富品 部分养殖场未能按照养殖规范采取有效 的传染性 系罗非鱼 (GIFT，Oreochromisniloticus)。患病罗 疾病的控制措施 ，导致罗非鱼各种细菌性病害逐渐 非鱼于2014年 3— 5月采 自海南文昌、琼海 、定安的 严重 ，制约了罗非鱼养殖业 的健康且可持续发展 。 罗非鱼养殖场 。体质量 10(罗非鱼幼苗)～500g 2014年 3 5月 间，海南主要罗非鱼养殖区大规模 (成鱼)。健康罗非鱼购 白海南省文 昌市某罗非鱼 暴发疾病 ，发病罗非鱼鳃盖、胸鳍基部和体表等部 养殖场，体长 14～16cm，体质量 (60±7)g，700尾 ， 位充血 ，少量个体尾柄鳞片脱落 ，偶见个体打转，解 暂养一周后用于后续试验。 剖见病鱼烂鳃 ，鳃上附着泥土，腹腔及肠道积水 ，肝 微量生化反应 管购 自杭州微生物试剂有 限公 脏充血且有少量 白点，胆囊严重充盈 ，少量个体脾 司 ，血平板购 自江 门市凯林贸易有 限公司。BHI培 脏肿大 ，肾脏 出血 。该病发病急，一旦发病 即在短 养基购 自青岛 日水生物有限公司，药敏纸片购 自杭 期内造成大量死亡 。本实验室从海南省罗非鱼主 州微生物试剂有限公司。 养殖 区采集发病罗非鱼 ，分离纯化获得此次爆发性 1．2 病原菌的分离纯化与培养 疾病病原 ，对该病原进行 了生理生化和分子鉴定， 将具有典型症状 的患病罗非鱼用 75 酒精棉 并检测 了该病原对一些常见抗菌药物 的敏感性 ，为 球擦拭体