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实验九 血糖的测定与应用 1 实验目的 ⑴ 掌握血糖的测定方法、原理及应用； ⑵ 了解血糖的正常值及糖饮食对血糖浓度的调节作用。 2 实验原理 ⑴ 福林—马尔露斯（Folin-Malmors）超微量法：在热碱溶液中的葡萄糖可将高铁氰化钾还原为低铁氰化钾，后者再与硫酸高铁盐作用生成亚铁氰化铁（普鲁士蓝），与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，即可求出血糖含量。 其反应如下： ⑵ 葡萄糖试剂盒测定法： 血糖浓度是相对恒定的，这是由于体内存在着各种调节血糖浓度的生理机制。 饱食和大量食糖后大量葡萄糖进入血液，使之血糖浓度增高，糖原的合成速度随之增大，但血糖浓度不久即恢复到正常。 长时间运动中血糖也有下降现象，下降程度因人而异。如马拉松赛跑时，中途退场者多因血糖下降而被迫终止比赛，能坚持跑到底，成绩优异者，血糖不下降或下降很少，所以血糖是评定运动耐力素质，监控耐力训练的生化指标之一。 正常值： 3.89-6.11mmol/L （70-110 mg/dl） 单位换算：mg/dl× 0.0555 = mmol/L 3 实验器材与试剂 ⑴ 器材 采血针、吸血管、超声清洗机、离心管、台式 离心机、试管架、水浴箱、可见光分光光度计、移液管 ⑵ 试剂 ① 0.03 mol/L H2SO4 ② 1%钨酸钠 ③ 碱性铁溶液：铁氰化钾0.8g，无水碳酸钠2.0g，加 蒸馏水溶解并至200ml，贮于棕色瓶中。 ④ 酸性硫酸高铁铵溶液：称取硫酸高铁铵2.0g，溶于50ml蒸馏水中，加入85%磷酸20ml，然后用纯净蒸馏水定容到100ml。 ⑤ 葡萄糖标准液 贮存液（10mg/ml）：称取纯无水葡萄糖1.00g用0.25%苯甲酸溶液溶解，倾入100ml容量瓶，最后用0.25%苯甲酸溶液稀释至刻度，摇匀，放冰箱保存。 标准糖应用液I（0.02mg/ml）：准确吸取贮存液0.2ml，置于100ml容量瓶中，加入0.25%苯甲酸液至刻度（用于标准管测定）。 标准糖应用液II（0.05mg/ml）：准确吸取上述贮存液0.5ml，置于100ml容量瓶中，用0.25%苯甲酸液稀释至刻度（作标准曲线用）。 0.25%苯甲酸溶液：称取苯甲酸2.5g，加入煮沸的蒸馏水1000ml中，使成饱和溶液，冷却后，取上清液备用。 4 实验方法与步骤 ⑴ 福林—马尔露斯（Folin-Malmors）超微量法 ① 取样 两位同学一组，分别取指尖血20ul，室温静置，制备血清；采血后分别食用蔗糖100g及面包100g，30min后同上采血，制备血清。 ② 血液中葡萄糖的测定 在离心管中加入0.5ml（0.03mol/L）硫酸，取指尖血0.02ml加入硫酸液中，混匀后加1%钨酸钠溶液0.48ml，静置10min，离心5min（3000r/min），取上清液0.5ml入测定管，按表3-9操作测定。 管 号 空白管 标准管 测定管 葡萄糖标准应用液I（0.02mg/ml） 蒸馏水 碱性铁溶液 — 0.5 1 0.5 — 1 — — — 沸水浴5 min，趁热加酸性硫酸高铁铵溶液 酸性硫酸高铁铵溶液 1 1 1 蒸馏水 4.5 4.5 4.5 混匀后比色 OD（λ=670nm 以空白管调零） 相当血糖mg% 表3-9 单位：（ml） 注：180.2指葡萄糖相对分子质量；10：1L等于10dl 正常值： 80~120mg%，平均106mg%。 计算： ⑵ 试剂盒测定法：如：采用浙江东瓯生物工程有限公司生产的葡萄糖测定试剂盒，按其操作步骤略加改进。① 基本参数：方法：终点法；波长：500nm；比色光径：0.5cm或1cm；反应温度：37℃；反应时间：10min；标本/试剂：1:150。 加入物 （μl） 空白管 标准管 测定管 血清 — — 10 标准液 — 10 — 试剂 1500 1500 1500 混匀置37℃水浴箱中保温10min，500nm波长，以空白管调零，用小号比色皿装盛溶液，测定各管吸光度。 ② 按表3-10操作： 表3-10 试剂盒操作表 ③ 计算： ⑶ 标准曲线制法 标准曲线就是一系列不同浓度（含量）标准溶液的光密度值对其相应的浓度（含量）作图，所得的坐标曲线。 标准曲线使测定工作简便，当需要测定大批样品或多次测定时，制作标准曲线，可免去标准管和对每份样品的计算，只需作测得的各样品光密度数值，查标准曲线便可迅速得出该样品的浓度（或含量）。 按表3-11操作，并绘标准曲线。表3-11单位：（ml） 管号 0 1 2 3 4 5 标准液II 0 0.1 0.2 0.