MiniMFC亚基间相互作用研究和eIF5CTD晶体结构研究.pdf

中用科学技术大学博I：学侮论文 中殳搁要 中文摘要 Mini-MFC组装机制的研究和elF5--CTD晶体结构的研究 多因子复合物(MFc)是43S前起始复合物形成过程中的一个重要的中间体， 它由elFl，eIF2，elF3和elF5四个蛋白质翻译起始因子包含十几个亚基组成 的蛋白质复合物。舡C在真核生物蛋白质翻译起始过程中起重要作用，主要参与 蛋白质重起始过程中三元复合物(TC)的招募和AUG起始密码子的正确识别。 eIF5--CTD四个亚基，其中eIF5--CTD是最关键的亚基，它可以与其它三个亚基相 互作用，从而介导mini-MFC的组装。 的一种特殊的GTP酶激活蛋白(GAP)，在真核生物蛋白质翻译起始过程中，对前 体起始复合物的组装和AUG起始密码子的正确识别起重要的作用。elF5-CTD除 eIF4G相互作用，在43S和48S复合物的组装过程中起核心作用。 本文先构建了mini-MFC的四个亚基，通过凝胶过滤层析法，荧光共振能量 转移法和沉降速度法对四个亚基的相互作用做了研究，并尝试计算解离常数。 首先我们对单个亚基的晶体结构进行研究，得到了eIF5一CTD亚基的晶体并收到 e 了1．5A的晶体数据。通过结构分析得知eIF5-CTD含有HEAT模式，与eIF2B --CTD和eIF4G哪D的结构相似。通过对表面静电荷分布的分析和保守序列的分 制以及复合物的晶体结构分析提供了重要的信息。 钩端螺旋体ebiC的晶体结构的研究 Ul 中同科学技术大学博}：学位沧文 LI|殳摘要 cbiC足维生素B12生物合成途径中的～种异构酶。它可以传化甲基重新排 列。维生素S12是自然界巾结构最复杂的蛋向质辅助因子之一，在合成过程巾 需要多种蛋白酶辅助完成。在原核生物和动物(包括人类)中许多酶需要维生 素B12做为辅酶因子，但仅有一些细菌和古菌能生物合成维生素B12。经过多年 的研究发现维生素B12的生物合成主要通过厌氧和好氧两种途径。这两种途径 的主要区别在于早期类似卧啉环的形成时Co’的插入时间，最先需要Co“‘插入的 途径为厌氧途径，最后需要co”插入的途径为好氧途径． 本文中的cbiC是从问号状钩端螺旋体(一种致病细菌)的cDNA通过PCR 克隆构建到pET22b载体上的基因，经过Ni柱亲和层析纯化。纯化的蛋白质通过 悬滴气相扩散的方法，得到了两种不同空间群的晶体分别是P4：2。2(3．OA)和 P3。2l(2．3A)。通过序列分析得知它与cobH(维生素B12生物合成途径之一： 好氧途径中的一种甲基变构酶)相似，因此通过分子置换得到cbiC的相位，并 解出结构。通过与cobH晶体结构的对比分析可以推测cbiC与底物的结合位点。 关键词： 多因子复合物，翻译起始， 钩端螺旋体，甲基异构酶，生物合成途 径 lv 中同科学技术大学博I：学付论文 AbstFact Abstract The ofmini-MFCandthe structureofeIF5-CTD assembly crystal Multifactor all intermediatein the43S complex(MFC)isimportant elFs 5andMet-tRNAiMa． 1，2，3，and pre-initiationcomplexassembly，containing MFCisinvolvedinrecruitmentofthe ofthe ternarycomplex(TC)andrecognition corrects