产脂肪酶微生物筛选及其全细胞固定化研究.pdf

摘要 摘要 在石油资源日趋枯竭和需求量日益扩大的双重压力下，大力发展生物柴油 对推动经济可持续发展、减轻环境压力、控制温室气体排放和建设低碳社会具 有特别重要的战略意义。生物酶法合成生物柴油与其他方法相比，具有反应条 件温和、醇用量小、对原料中水和游离脂肪酸含量要求低、无污染排放等优点。 但目前商业脂肪酶一般价格较高，制约其在工业生产中的广泛应用。 土壤中蕴含丰富的微生物资源，而脂肪酶在微生物中分布广泛，因此本研 究首先从富油土壤中自主筛选具有产脂肪酶活性的菌株，研究其酶学活性和生 物学特性，寻求适于植物油脂酯化合成生物柴油的菌株，以期降低酶法制生物 柴油的工业生产成本。利用维多利亚蓝法筛选得到一种产脂肪酶活性较好的菌 sp．)。 株。经16SrRNA分子生物学鉴定，该菌株为阴沟杆菌(Enteyobactey 本论文对该菌株产脂肪酶活性进行了研究。通过研究时间、温度等条件对阴沟 杆菌产脂肪酶活性的影响，确定生产脂肪酶的最佳周期为4天，最佳培养温度 为32℃。随着培养液pH从弱酸性向弱碱性，再向强碱性变化，脂肪酶活性先 上升后下降，确定最佳pH为8．5。 游离酶易聚集成团，极不稳定，且不易分离，流失严重，使得酶法制生物 柴油成本过高，所以酶的固定化技术得到一定发展。目前酶的固定化技术由于 固化效率低和酶失活较严重，成本较高等原因，制约着该技术的产业化应用。 本论文分别尝试和比较了几种脂肪酶固定法。吸附固定法：利用滤纸结合真空 抽滤将发酵液中的脂肪酶固定到滤纸上，脂肪酶活性失活率约为50％；合成了一 种多胺化壳聚糖金属配合物小球作为吸附载体，用来吸附产脂肪酶菌株全细胞， 结果未检出活性；全细胞包埋法：将海藻酸钠与发酵液共同培养，之后在氯化 钙溶液中钙化成球，得到包埋有产脂肪酶菌株的海藻酸钙凝胶颗粒，然后用壳 聚糖溶液对海藻酸钙颗粒进行包埋，获得了一种包埋胶囊，海藻酸钙凝胶颗粒 能够保持相应脂肪酶活性的32％左右，包埋胶囊未检出活性，但是剖开胶囊能够 检测出少量活性。 关键词：生物柴油，生物酶法，产脂肪酶菌，固定化全细胞 Abstract _———————————————————————————————————————一 Abstract anddemand oilexhaustion develop Underthe ofcrude increasing，to pressure tosustainable ofeconomy, thebiodieselisof development strategic importance emissionand theenvironmental greenhousegas lightening stress，controlling to toothermethods biodiesel， low．carbon synthesize constructing society．Compared