多重pcr技术速检测海洋病原微生物.pdfVIP

摘要 摘要 海洋是孕育地球生命的摇篮，与人类关系十分密切。然而随着沿海城市经 济的繁荣，越来越多的城乡生活污水和工业废水排向海洋，导致大量病原微生 物进入海洋环境造成污染。病原微生物广泛分布在海水、底泥和海洋生物的体 内，能通过饮食或接触引起人类疾病，比如呕吐、腹泻、肠胃炎，甚至霍乱等 传染性很强的疾病；或者分布在海产品中，引起鱼虾贝类生病，给水产养殖业 带来损失。对海洋环境中的病原微生物进行监测，对于评估海洋海洋环境质量 和海产品安全、进行疾病的预防以及降低相关经济损失，具有十分重要的意义。 PCR技术是近年来迅速发展的检测技术之一，由于具有操作简便、特异性强、 灵敏度高、对样品的纯度要求低等优点，应用范围涵盖了临床医学、遗传学、 免疫学等。多重PCR技术作为衍生PCR技术的一个分支，由于更加简便、省 时、成本效益高，在越来越多的研究领域中发挥着重要作用。 本课题为《衍生PCR技术对渤海天津沿岸病原微生物的快速检测》，是天 津市应用基础及前沿技术研究计划的项目，主要目标是研发用于快速检测海洋 环境中病原微生物的技术，建立起切实可行的检测方法，反映海洋环境受病原 微生物污染的状况，为传染病的防治及环境评价提供依据。 mM，两 本论文建立起的双重PCR方法，反应体系为25ktl，包含M92+1．5 对引物上下游浓度均为O．25 DNA聚合酶0．05U／}l pM，4种dNTP0．1mM，Taq 和1×PCRbuffer，检测限为副溶血弧菌2．11个／ml，创伤弧菌1．84个／ml。本论 mM，两对引物 文建立起的三重PCR方法，反应体系也是259l，包含M92+3．5 DNA聚合酶0．05U／g和 上下游浓度均为0．125州，4种dNTP0．1mM，Taq 1×PCRbuffer，检测限为霍乱弧菌26．02个／ml，副溶血弧菌2．11个／ml，创伤弧 菌1．84个／ml。双重和三重PCR扩增的程序为：94。C预变性10分钟；三温循环 钟。用本文建立起的方法对从渤海沿岸采集的海水样品进行检测，发现三种病 原微生物的含量在不同季节、不同地区有较大差别。试验中发现所建立的PCR 检测方法仍有不足之处，需要进一步完善。 关键词：多重PCR，霍乱弧菌，副溶血弧菌，创伤弧菌，海水样品 Abstract Abstract TheoceanisconceivedthecradleoflifeontheEarth．The relationships betweenhumanandtheoceanis theeconomic veryclose．However,with prosperity ofthecoastal andmore and cities，more industrialwastewateris sewage dischaged intothe resultinthemicrobialcontaminationofthemarine ocean，which environment．The are distributedinthesea pathogenicmic