猪2型链球菌MRP基因的克隆及表达.pdfVIP

兰州大学硕士研究生论文 中文摘要 suis 猪链球菌(StreptococcusS．suis)是一种重要的人畜共患病原体，可引起 猪脑膜炎、心内膜炎、关节炎及败血症等疾病，亦可引起人类感染，导致脑膜炎及 中毒性休克综合征等严重疾患。该菌有33个血清型，其中以2型流行最广、致病 性最强。猪链球菌有多种毒力因子，如溶菌酶释放蛋白(MRP)，溶血索(SYL)， 胞外蛋白因子(EF)等，但MRP是该菌最为重要的毒力因子之一。 本研究根据猪2型链球菌溶菌酶释放蛋白编码基因序列，设计并合成1对特异 性引物，以猪2型链球菌青海株基因组为模板扩增MR／基1医134—813bp片断，并进 行T／A克隆，转化大肠杆菌。成功获得目的片断，将目的片段定向克隆到pET-28a(+1 组氨酸的下游。用鉴定阳性的重组质粒转化BL21，经IPTG诱导可表达分子量约 27 kD的融合蛋白。免疫印迹分析表明，该融合蛋白具有MRP的抗原表位。 本研究克隆了猪2型链球菌青海株MRP基因完整的阅读框。编码区长度为 3771bp，与已登陆的序列对比发现此基因的阅读框高度保守。将克隆的青海株的 感受态大肠杆菌，经同