HMME-PD对兔血管平滑肌细胞的杀伤作用及机制的研究.pdfVIP

堕丛丛丛娶：￡坠!壁叁垒鲎±盈盟垫丝盟釜笪笠旦壅垫剑鲍堑宝． 生塞垫兰 HMME．PDT对免血管平滑肌细胞的 杀伤作用及机制的研究 专业：生物医学工程 硕士生：阴慧娟 指导教师：李晓原副教授 摘要 冠心病是严重危害人民健康的常见病。近二十年来随着介入性治疗的飞速发 展，血管成形术已成为冠心病和外周血管疾病治疗的有效手段之一。但术后较高的 smoothmuscle 再狭窄率成为困扰人们的新问题。血管平滑肌细胞(vascular cell， VSMC)的异常增殖及其从动脉中层向内膜迁移过程是血管成形术后再狭窄的重要 发病因素，因此抑制血管平滑肌细胞增殖是控制血管再狭窄的重要方式。目前已针 对血管平滑肌细胞的异常增殖研究了多种药物和对抗措施，有多种包括基因、生长 因子、放射、激光等不同的预防血管再狭窄的技术和方法。激光光动力疗法就是其 中的一种新型的医疗技术。 光动力学疗法(photodynamictherapy,PDT)是激光治疗的一种方法，是利用光 敏剂分子接受特定波长的光能后通过光化学反应和能量传递过程将光能转化为分 子内能，在有氧条件下，产生多种活性氧物质(reactiveoxygenspecies，ROS)，包括 单线态氧(102)、氧自由基、羟自由基等等，从而对蛋白质、核酸和脂类等生物大 分子产生破坏作用，使细胞的结构和功能受到严重影响，导致细胞凋亡或坏死，从 而起到治疗作用。光敏剂是光动力学治疗的核心物质，光动力疗法的发展及应用都 随着光敏剂的发展而逐渐完善。 从上世纪80年代起人们开始用PDT技术进行血管再狭窄预防的实验研究。但 这些研究主要采用第一代光敏剂，存在着体内滞留时间长，毒副作用大的问题，近 年来第二代光敏剂的发展克服了第一代光敏剂的缺点，采用第二代光敏剂的光动力 学疗法用于血管再狭窄的研究越来越引起人们的重视。 n 血卟啉单甲醚(Hematoporphyrinmonomethylether,I-IMME)是一种组成单一、 性能稳定的新型光敏剂。其特点是从组织中清除迅速，对正常组织的光毒作用很低， 因此给药后避光时间短，另外它的成分单一明确、组成稳定、活性氧产量高。这些 都使得它成为一种很有前途的新型光敏剂。目前主要用在肿瘤PDT治疗的研究中。 采用HMME-PDT对血管平滑胍细胞作用的研究很少，而采用激发效率较高的 道。 因此本课题拟选用HMME做光敏剂，532nm激光为光源，研究不同不同光敏 剂剂量及不同激光照射剂量的光动力学作用对兔血管平滑肌细胞的影响，用MTT 法、台盼蓝法检测及形态学观察研究HMME．PDT对VSMC细胞的杀伤作用，用流 式细胞仪等观察细胞凋亡的情况，用流式细胞仪和共聚焦显微镜等方法观察活性氧 物质的产生、HMME在细胞内的分布以及细胞骨架的变化来探讨HMME．PDT诱导 凋亡的可能机制。为临床提出一种预防血管成形术后血管再狭窄新方法并设计开发 相应的专用激光治疗设备提供依据。 材料与方法： l材料 1．1试剂 It 光敏剂HMME由上海第二医科大学药物研究所提供，工作液浓度为lO g／ml， 由不含血清的RPMI1640新鲜配制。AnnexinV／PI双染试剂盒购自罗氏公司。 Rohdamine Probes 牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司，经热原处理。 1．2仪器 光源为光纤耦合半导体激光器，由武汉凌云光电科技有限责任公司生产，输出 激光波长532nm。激光功率计为加拿大G-ente