巢湖蓝藻多糖的离、纯化及理化性质研究.pdfVIP

摘要 铜绿微囊藻是巢湖水华蓝藻主要组成藻类，其含量能够达到98％以上。铜 绿微囊藻在腐殖化过程中会释放大量的有毒有害物质，这对巢湖水体及周围环 境造成了严重的环境污染。在直接打捞水华蓝藻仍是治理巢湖富营养化的有效 方法前提下，如何充分利用打捞上来的水华蓝藻是摆在人们面前的难题。本文 从水华蓝藻中提取多糖这一生理活性物质，这为水华蓝藻处理提供了一条变废 为宝、提高综合治理效益的有效新途径。 本论文以直接打捞的巢湖水华蓝藻为研究对象，采用反复冻融3次破壁， G150分离纯化其中的水溶性酸性多糖。通过响应面曲线法确定蓝藻多糖的最佳 提取优化条件；对纯化过后的蓝藻多糖进行相关性质和结构方面的鉴定和体外 抗氧化研究，主要结论如下： 1．比较了反复冻融法和溶菌酶法对蓝藻细胞壁的破除效果，结果表明反复 冻融法的破除效果强于溶菌酶法。正交试验优化提取条件：采用水提醇沉法提 取打捞的巢湖水华蓝藻中的多糖，并通过提取料液比、提取温度、提取时间三 个单因素影响试验，确定中心组合实验影响因素和水平；最后通过中心组合试 验并采用相应面分析的方法确定蓝藻粗多糖最佳提取工艺：提取温度53。C、提 取时间4．3h、提取料液比1：51。 2．比较了硫酸铵除蛋白和Savage除蛋白效果。硫酸铵除蛋白效果明显强于 Savage法，而且过程中不会使用和产生有毒有害物质。多糖粗提物经过硫酸铵 除蛋白(饱和度为100)，多糖粗提物中93％以上的蛋白质含量被去除得到粗多 糖。 3．蓝藻粗多糖通过DEAE-52纤维素柱交换层析，NaCl洗脱得到酸性蓝藻多 糖，透析袋除盐后通过SephadexG150葡聚糖凝胶柱纯化得到相对均一酸性蓝 藻多糖CHAP。 4．CHAP的紫外光谱表明CHAP不含蛋白质和核酸，红外光谱扫描结果表明 CHAP是吡喃糖并具有Q-D-半乳吡喃糖的特征吸收峰。高效液相测定CHAP的分 子量为2．209×105，其图谱同时也表明CHAP组分较均一。离子色谱表明CHAP 万方数据 的甘露糖及一种未知单糖构成。通过高碘酸氧化有甲酸生成，说明含有1-4或 卜6糖苷键，从其生成量来看说明CHAP结构中分支较多。甲酸生成量大约是高 碘酸的消耗量的二分之一，可以推测此多糖为分支或1—6连接较多的结构，也 可能存在不少只消耗高碘酸并不产生甲酸的1—2或1—4键型。 5．体外抗氧化实验结果：CHAP对DPPH和超氧自由基有较强的清除能力， li u 其It50分别为276g／mL和186．05g／mL。CHAP对羟基自由基的清除能力较 弱，清除率不到10％。 关键词：巢湖；蓝藻多糖；理化性质；抗氧化作用 II 万方数据 Abstract in of Chaohu，mainlycomposedMicrocystisaeruginosa，Whose Cyanobacteria ismorethan98％．Lotsoftoxicorharmfulsubstancesare composition percentage releasedinthe of will the decayingmicrocystisaeruginosa．Thatseriouslydamages waterandairofChaohu．Thedirect of is andeffective cyanobacteriapositive