基因工程第三章分子克隆载体精品.ppt

第三章 分子克隆载体 Mol;将外源DNA或基因携带入宿主细;利用重组DNA技术分离目的基因;由大量的含有基因DNA（即某一;一 、质粒的基本特性第一节 ;复制子(replicon)有不;RNAIIori-550600;无标题;合成RNAII即前引物，形成杂;② 拷贝数(copy numb;pUC系列载体的拷贝数较高，主;pMB1质粒的复制并不需要质粒;3.质粒的不相容性(plasm;4.转移性(transferr;1.选择标记(selectiv;青霉素是一类化合物的总称，其分;(2) 四环素抗性基因 te;(3) 氯霉素抗性基因 Cmr;(4) 卡那霉素和新霉素抗性基;(5) 琥珀突变抑制基因 ;(6) 其它 正向选择标;2. 筛选标记(1) ?-互;IPTG：异丙基-?-D-硫代;LacZ△M15LacZ’IP;材料背景 在载体中加入;当lacZ’与lacz?M15;?-互补(α-compleme;相应的受体菌 TG1, X;(2) 插入失活(insert;三、质粒载体的种类① pBR3;② pBR322以后，调整载体;1．克隆载体(cloning ;无标题;Ap;Ap;ApAp+TcAp;ApAp+TcAp;ApAp+TcAp;② pUC18/192686b;无标题;Multiple clonin;③ pUC118/119 1;无标题;④ 体外转录 pGEM-3;无标题;⑤ 综合性载体pTZ18/19;Bluescript M13 ;无标题;载体应具备以下特点：1.在宿主;2.表达载体(expressi;第二节 ? phage ve;无标题;1.最早使用的克隆载体(clo;一、?噬菌体的分子生物学 ;? / HindIII(7 个;（一）?噬菌体的发育调节1. ;?噬菌体生活史简图;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;GGGCGGCGACCTCCC;无标题;无标题;无标题;CCCGCCGCTGGAGGG;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;无标题;Phage particlel;Phage particlel;Phage particlel;Phage particlel;无标题;2．早期转录—立即早期、延迟早;Cro/cII的优势，引入不同;Wild type E. co;溶源现象的生化媒介可能是 3’;3.进入裂解周期(lytic ;无标题;Nul 和 A 蛋白与cosL;?噬菌体的包装;4.溶源化(lysogeniz;无标题;attPgalattBbioc;b) excisionprop;? 转导噬菌体的形成正常切离;? 转导噬菌体的形成不正常切离;? 转导噬菌体的形成?d?dg;无标题;（二）?噬菌体的可取代区1.区;2.大小60%区域为裂解所必须;二、?噬菌体的选择标记1. 大;Spi+：?噬菌体不能感染 ;?噬菌体包装时若gam-，需r;插入型载体 insertion;（一）插入型载体(insert;宿主菌：C600(BNN93);2.?gt11 插入型 ;无标题;Sam100：supF突变，防;3. ?GEM-2/4?GEM;无标题;4.?ZAP II与?gt11;Infected by hel;单个?噬菌体或扩增的文库与丝状;5. ?Excell ;? ExCell 载体释放出质;了解?ZAP11和?ExCel;（二）置换型载体(replac;Vector ;Vector ;EMBL 3/4 L 20kb;Charon 40 s;?DASH 9-22kb;?GEM-11 ;结合?包装过程1.通过裂解过程;包装感染铺平板筛选阳性克隆基因;N=ln(1-p)/ln(1-;载体与外源片段的连接去磷酸化(;无标题;一、粘粒(cosmid)的结构;N=ln(1-p)/ln(1-;二、克隆原理及步骤1.分离外源;无标题;无标题;无标题;三、用途1.在构建基因文库(g;在“染色体步查(chromos;Sau3A1经连接转化，可得到;无标题;Hu, et al., MM,;四、粘粒克隆载体1.pJB8 ;无标题;包装感染铺平板筛选阳性克隆基因;无标题;无标题;无标题;无标题;2.c2RB大小：6.8kb ;无标题;无标题;无标题;3.pCOS1 EMBL用于筛;无标题;Ori/R6KOri/ColE;排布：SalI、cos、MCS;无标题;*：重复单元中含SalI位点，;5.pWE15;无标题;无标题;五、文库的扩增和贮存1. 滤膜;自我连接(self-ligat;1．提取的基因组DNA