基因工程转基因植物精品.pptVIP

1.3.1 选择性培养检测（抗性基因检测） 一般用抗性基因来富集转化细胞。抗性基因应满足以下几点： A. 抗性基因应是显性基因。 B. 在选择压力下，转化细胞能继续生长，而非转化细胞受到抑制，从而使转化子得到富集。 C. 抗性基因产物本身不能对转化细胞的生长或发育有抑制作用。 D. 选择物价廉易得。 1) 抗生素抗性基因 （1）npt 新霉素磷酸转移酶基因，对卡那霉素、巴龙霉素、新霉素具有抗性。 （2） aphIV 潮霉素磷酸转移酶基因，对潮霉素具有抗性。 （3）spt 链霉素磷酸转移酶基因，对链霉素具有抗性。 （4）cat 氯霉素乙酰转移酶基因，使氯霉素丧失抗生素活性。等等。 2）抗除草剂基因 除草剂抗性基因在植物遗传转化中可同时用作选择标记和培养抗除草剂的作物。 抗除草剂基因主要有抗PPT的bar和pat基因以及抗草甘膦的epsps基因。 第十章 转基因植物 1 转基因植物 是指利用基因工程技术，在离体条件下，对不同生物的DNA进行加工，并按照人们的意愿和适当的载体重新组合，再将重载体转入受体中，并使其在体内表达的植物。 转基因植物通常具有高产优质、抗病虫、环境抗性、抗除草剂、耐储存、提高某些成分的含量等优良性状。 作物转基因育种 就是根据育种目标，从供体生物中分离目的基因，经 DNA重组与遗传转化或直接运载进入受体作物，经过筛选获得稳定表达的遗传工程体，并经过田间试验与大田选择育成转基因新品种或种质资源。 与常规育种技术相比，转基因育种在技术上较为复杂，要求也很高，但是具有常规育种所不具备的优势： 1.拓宽可利用的基因资源； 2.培育高产、优质、高抗优良品种提供了崭新的育种途径； 3.可以对植物的目标性状进行定向变异和定向选择； 4. 可以大大提高选择效率，加快育种进程。 此外，还可将植物作为生物反应器生产药物等生物制品。 1.1 受体 受体 是指用于接受外源DNA的转化材料。 良好的植物基因转化受体系统应满足如下条件： 1) 高效稳定的再生能力； 2) 受体材料要有较高的遗传稳定性； 3) 外植体来源方便，如胚和其它器官等； 4) 对筛选剂敏感； 5) 转化率高 常用的受体材料有以下几大类型: 1.1.1 原生质体 原生质体恢复细胞壁具有分化再生能力，是应用最早的再生受体系统之一。 优点：高效、广泛地摄取外源DNA或遗传物质，获得基因型一致的克隆细胞，所获转基因植株嵌合体少，适用于多种转化系统； 缺点：不易制备、再生困难和变异程度高。 1.1 受体 1.1.2 愈伤组织 外植体材料经过脱分化培养诱导形成愈伤组织，转化（带有目的基因质粒的农杆菌侵染），分化培养获得再生植株。 优点：外植体来源广，繁殖快，易接受外源基因， 转化效率高。 缺点：遗传稳定性差、嵌合体 因此需要连续的再生系统 1.1 受体 1.1.3 直接分化再生 外植体材料细胞不经过脱分化形成愈伤组织阶段，而是直接分化出不定芽形成再生植株。 优点：周期短、操作简单，体细胞变异小，遗传稳定； 缺点：材料局限，转化率低。 1.1 受体 1.1.4 胚状体 是指具有胚胎性质的个体。 优点：个体数目巨大、同质性好，接受外源基因能力强， 嵌合体少，易于培养、再生。 缺点：技术含量高，多数植物不易获得胚状体。 1.1 受体 1.1.5 生殖细胞受体系统 以生殖细胞如花粉粒、卵细胞等受体细胞进行外源基因转化的系统。 一是利用组织培养技术进行小孢子和卵细胞的单倍体培养、转化受体系统； 二是直接利用花粉和卵细胞受精过程进行基因转化，如花粉管导入法，花粉粒浸泡法，子房微针注射法等。 1.1 受体 1.2 转基因方法 概括起来说主要有两类： 外源目的DNA的直接转化。 以载体为媒介的遗传转化，也称为间接转移系统法。 1.2.1 外源基因直接导入法 （1）化学刺激法 细胞融合剂：聚乙二醇（PEG）、聚乙烯醇（PVC）等 植物细胞的原生质体经过聚乙二醇(PEG)、磷酸钙、氯化钙等化学药剂处理之后，便能够捕获外源的转化DNA。 (2) 基因枪轰击法（微弹轰击技术micro-projectile bombardment) 将外源DNA包裹在微小的钨粉或金粉颗粒的表面，借助高压动力射入受体细胞或组织，最后整合到植物基因组并得以表达。 步骤简单易行：适合于大多数细胞或组织，克服了受体材料的限制，不必制备原生质体，具有相当广泛的应用范围，已经成为植物细胞转化最有效方法之一。 到目前为止，利用基因枪法已经在烟草、豆类和多数禾本科农作物、果树花卉和林木等植物上获得转基因植株。 (3) 微注射法 细胞操作： 利用琼脂糖包埋、聚赖氨酸粘连和微吸管吸附等方式将受体细胞（