课题一微生物的实验室培养创新.pptVIP

无机盐：无机盐也是微生物生长所不可缺少的营养物质。其主要功能是：① 构成细胞的组成成分；② 作为酶的组成成分；③ 维持酶的活性；④ 调节细胞的渗透压、氢离子浓度和氧化还原电位。 常见的无机盐有：磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁、锰、铜、钴、锌、钼 水：水是微生物的重要组成部分 生长因子：对微生物有显著影响的微量有机物。常见的有氨基酸、维生素、嘌呤、嘧啶及其衍生物 （3）按培养基的成分来分 天然培养基：由天然物质制成的培养基。如：煮熟的马铃薯、腐乳制作豆腐。 半合成培养基：在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类 。如：泡菜制作。 合成培养基：培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。如：高氏一号合成培养基 4、常用的消毒与灭菌的方法 (1)消毒的方法 煮沸消毒法：100℃沸水煮5-6min。 巴氏消毒法：70-75 ℃煮30min；80 ℃煮15min 化学试剂消毒法:酒精消毒、高锰酸钾溶液 消毒，甲醛消毒等 紫外线消毒法：紫外线消毒30min，臭氧消 毒。 * 专题2 :微生物的培养与应用 课题1：微生物的实验室培养 一、基础知识 （一）、培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基 碳源：凡是作为微生物细胞结构或代谢产物中碳架来源的营养物质，称为碳源。常见的碳源有：糖类等含碳有机物、二氧化碳等。其中有机碳为微生物提供能量。 氮源：凡是构成微生物细胞的物质或代谢产物中氮元素来源的营养物质。常见的碳源有：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、玉米浆 ，有的微生物能利用无机氮 。 1、培养基的基本成分 液体培养基：主要在生产中应用。 固体培养基：用于菌种的鉴定和选择（可在 液体培养基的基础上再添加琼脂） 半固体培养基：介于液体培养基与固体培养 基之间。 2、培养基的种类 （1）、按物理状态分 （2）、按用途分 选择培养基：加入某种化学物质，从众多微生物中分离出所需微生物。 鉴别培养基：加入某种试剂，鉴别不同种类的微生物（伊红与美蓝使大肠杆菌显深紫色） 加入青霉素的培养基: 不加有机氮源的无氮培养基: 不加含碳有机物的无碳培养基: 几种选择培养基举例： 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离固氮菌 分离自养型微生物 唯一碳源为纤维素的培养基 分解纤维素的细菌 定溶至1000mL 水 20g 5g 10g 5g 重量 琼脂 NaCl 蛋白胨 牛肉膏 物质 二、无菌技术 1、无菌技术：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。 2、无菌技术的种类 （1）消毒：使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死物体表面和内部的微生物。 （2）灭菌：使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。 3、在微生物培养中需要进行无菌操作的环境与物品 对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒； 将培养皿、接种用具和培养基等进行灭菌； 接种的过程要在酒精灯火焰附近进行灭菌。 灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。 （2）灭菌的方法 干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160～170OC中加热1～2h即可。 高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到100kPa，温度到121OC后，维持15～30min即可。 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算（按培养基的营养成分表计算配制100mL培养基） 定溶至1000mL 水 20g 5g 10g 5g 重量 琼脂 NaCl 蛋白胨 牛肉膏 物质 2.称量 准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。 三、实验操作 3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至100mL。 4.灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（3～5套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。 5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时倒平板。 倒平板操作的讨论 1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？ 用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？