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中药材佛手的种质资源及遗传多样性研究 专业：植物学 姓名：郝大庆 指导教师：廖文波教授 摘要 佛手(Buddha’sHa耐citron)，学名Cffr“s聊e旃c口L．VaL s口肋如c彬括(Noot．) Sw崦le，为芸香科柑橘属植物香橼(CffM聊P班∞L．)的变种，十大广药之一， 是传统的名贵中药。佛手不仅可供药用，还可发展佛手盆景市场，其挥发油可应 用于食品和化妆品等方面，因而具有很大的开发利用价值。但由于长期以来粗放 种植，致使品种混杂、退化，病虫害严重，产量和品质参差不齐，严重妨碍了佛 手产业的规范化种植和质量控制。本文从植株形态、SSR分子标记两方面对采自 浙江金华，重庆南龙，广东肇庆、高要、武垄、潮州、梅州、汕头(来自新加坡) 等共八个地方的佛手进行分析，以研究其各种质间的亲缘关系，为佛手GAP规 范化种植提供有益的技术支持。 从叶片气孔器特征和花粉两方面研究三种佛手的形态差别，观察和测量了 40枚叶片的气孔器和50粒花粉的形状和大小，发现来自浙江、重庆、广东三个 佛手品种，在气孔器和花粉形态特征上比较一致，差异较小。 利用Fastprep法成功提取了3省8个佛手居群的基因组DNA，结果发现从 当年生已完全展开的叶片提取的DNA质量和得率都较好，完全满足实验需要。 利用汕头(来自新加坡)和浙江金佛手群体中的植株DNA，从53对SSR引物 中筛选出5对可以扩增出条带清晰、多样性高、反应稳定的引物。其中，CCSM3 的扩增产物多态性最高，可以扩增出4条在各居群内具有多样性的条带。其次为 两对引物只能分辨出汕头的佛手个体，多样性最低。在扩增过程中建立了优化的 20“l体积的SSR反应体系和PCR反应程序。 利用筛选出的5对SSR引物对8个居群的122个个体进行研究，共发现13 Ⅲ 个等位基因。采自汕头(种源来自新加坡)的多样性最高，其香农指数，、观测 杂合度Z汤、期望杂合度胁分别为O．648、0．733、0．547。其次为广佛手潮州的 居群。广佛手高要和川佛手重庆群体的多样性最低，其香农指数厶观测杂合度 胁、期望杂合度胁都为O，所用引物未能在这两个居群中得到具有多态性的条 带。广佛手其余各群体多样性相近。推测佛手群体尤其是我国佛手遗传多样性很 低的原因可能是在约700年的栽培历史中，长期营养繁殖、人工选择以及缺乏野 生种质交流，导致佛手种质的遗传多样性流失严重，遗传基础变得很窄，基因趋 于纯合。 F统计显示佛手出现了较高的群体间遗传分化(鼢=O．277)，群体间基因流 离和地理距离的相关性，结果显示佛手群体间的遗传距离和地理距离相关性很高 中于广东境内，未采到分布于东南亚等地的佛手居群有关。而且国内近年来，佛 手干片和鲜果价格持续走低，很多种植户将佛手砍掉，改种其它经济作物，造成 采样困难。 本文的研究结果显示：我国佛手种质资源的遗传多样性较低，远远低于新加 坡的佛手种质的遗传多样性。研究的佛手群体可明显的分为3大类：采自广东汕 头(来自新加坡)的自成一支，与其它种群的遗传距离较大；广佛手5个群体与 重庆采的川佛手亲缘关系很近，一共6个居群构成一支；金佛手自成一支，介于 新加坡分支和由广佛手、川佛手共同构成的分支之间。推测川佛手很可能是由广 佛手传播到当地，在长期的栽培历史中在人工选育下形成的。而广佛手则可能与 金佛手来自同一种源，都是来自东南亚国家。 关键词：佛手形态特征SsR遗传多样性 Ⅳ andGenetic of on Resources DiVersity StudyGemplasm L上N(Noot．)OOL夕 a护淞所e西c口var．s口聊如c加觑s【／。Z力。ZZS所edZC口Var．。S口聊口口C砂Z扰S Swingle3Wlng王e M旬or：B