产褐藻胶裂解酶孢杆菌的选育及其产酶性质的研究.pdfVIP

产褐藻胶裂解酶芽孢杆菌的选育及其产酶·陛质的研究 摘要 本文以一株土壤来源的芽孢杆菌为出发菌，在以褐藻酸钠为唯一 碳源的培养基中驯化筛选后得到一株产胞外褐藻胶裂解酶的菌株S1， 通过菌种鉴定，确定其为枯草芽孢杆菌(肋cj』』ussubtiJis)。该菌 产酶的较适碳源为0．5％(质量分数)的褐藻酸钠，较适氮源为蛋白 时，酶活最高可达18．79U／mL。 以菌株sl为出发菌株，进行复合诱变和选育，获得一株酶活力 显著提高，生物学性状稳定的突变株EMS-50，其发酵液酶活力从18．94 U／mL提高到43．22U／mL(DNS法)。 该酶为胞外诱导酶，甘露糖与褐藻酸钠均可诱导其合成褐藻胶裂 解酶，葡萄糖可促进以褐藻酸钠为诱导物时酶的合成。以蛋白胨+尿 素+酵母膏为氮源时产酶较好。通过正交实验，确定了其最佳发酵培 养基组成为：褐藻酸钠0．6％，尿素0．6％，蛋白胨0．6％，葡萄糖0．2％， 最高酶活达到75．86U／mL。 发酵液经硫酸铵沉淀后制得粗酶液，用于酶学性质的研究。该酶 K+、 温度在20—400时该酶具有较好的稳定性。一价金属离子Na+、 Li+与二价金属离子Mg”对酶活性具有～定的促进作用，其中Mg2+对酶 活的影响较大。Zn”、 Ca“、Mn”、Fe”、Fe2+对酶活产生了不同程度 的抑制作用，EDTA对酶具有明显的抑制作用。该酶的米氏常数Km为 0．39mg／mL。 关键词：褐藻胶裂解酶：芽孢杆菌；诱变选育：酶学性质 The andincubationofBaciIlus n screeRing Sp．Stai and 013 aIginateIyaseresearchesits producing properties Abstract ABacillus screenedfromsoilwasCUlturedand in sp，Stain screened thesolidmediumwiththe the sodium as solecarbonsource． alginate astrainS1 which could theextra—cell was Finally produce alginatelyase chosenastheinitialstrainforthe strainS1 followingexperiment．The wasidentifiedasBacillussubtilis．Theresearchhasfoundthatthe conditionsof areasfollows．The optimum producingalginatelyase sourceswere andurea．The contentofsodium nitrogen peptone optimal wasO．5～0．6％．The w