柑橘皮渣发酵液黄酮分离纯化及其功能性研究.pdf

柑橘皮渣发酵液总黄酮分离纯化及其功能性研究 食品科学硕士研究生任廷远 指导教师王 华研究员 摘 要 中国农科院柑橘研究所加工课题组通过十几年不断探索和无数次试验，成功研制具有自 主知识产权的一种新型饲料添加剂——柑橘皮渣发酵饲料，该技术已于2005年7月通过重庆 市科委成果鉴定。该技术为我国柑橘皮渣综合利用提供了一条很好的途径，具有重要的经济、 社会和环保意义，符合国家的资源再生利用与环保政策，有利于柑橘加工综合利用和污染治 理，同时给其它农副产品加工副产物在综合利用方面提供了新的思路。2006年在科技部和重 庆市科委的大力支持下，该技术分别成功申报了国家科技部农业科技成果转化资金项目“柑 橘皮渣发酵饲料加工关键技术中试”、农业部现代柑橘产业技术体系“橙汁加工”和重庆市科 委柑橘重大专项中的“三峡库区柑桔皮渣综合利用关键技术及成套设备研制”项目，这标志 国家及省市对柑橘皮渣综合利用产业化的重视。2007年在中国农科院柑桔研究所、重庆大学 和汇源集团万州加工厂的共同努力下，圆满地完成了柑橘皮渣发酵饲料工业化试生产及成套 设备的研发，形成了一整套成熟工艺路线和完善的技术参数，同时柑橘皮渣发酵饲料试验产 品已通过重庆隆生饲料有限责任公司的饲喂试验。 本试验主要对柑橘皮渣发酵生产饲料过程中产生的发酵液进行研究。主要分析了发酵液 中的活性成分、对比研究了发酵液中总黄酮的提取工艺、总黄酮的分离纯化及其功能性研究。 给工业化生产柑橘皮渣发酵饲料过程产生的大量发酵液的处理及利用提供一定的指导。主要 研究结果如下： 1．对中试及工业化生产所得6个发酵液样品进行分析得出：发酵液粗蛋白含量为0．9825％： 总黄酮含量为3554．6150 蔗糖含量为0．23179／100mL；总糖含量为1．5514g／100mL；可滴定酸值为0．8016(以柠檬酸计， 脂肪含量为0．0154％；干物质含量为7．73％。 2．研究水浴乙醇回流提取柑橘皮渣发酵液中总黄酮工艺：由正交试验得知最佳工艺条件 次，可得柑橘皮渣发酵液中总黄酮得率为17．281±0．15 g／kg。 3．采用四元二次通用旋转组合设计优化超声波辅助提取柑橘皮渣发酵液中总黄酮工艺参 数，并得到各因素与总黄酮得率(Y)的回归方程模型为： 50x4Z-0．55606XlX2-0．09956xlx3+0．09956xlxa-0．1186x2x3-0．08994x2xa-0．04369x3rq I 由模型的极值分析并结合单因素实验，超声波乙醇辅助提取柑橘皮渣发醇液中总黄酮的 最佳工艺参数为：超声时间4min，料液比l：40，乙醇浓度70％，超声功率70％。在此条件下 提取总黄酮得率高达21．935±0．039／kg。 4．研究以乙醇为溶剂微波辅助提取柑橘皮渣发酵液中总黄酮的工艺，由模型的极值分析 并结合单因素实验得出，微波乙醇辅助提取柑橘皮渣发酵中总黄酮的最佳工艺参数为：提取 时间50s，料液比1：40，乙醇浓度70％，微波功率500W。通过验证试验，此条件下总黄酮得 率为23．7384-0．079／kg。 5．通过不同类型的树脂对柑橘皮渣发酵液中总黄酮粗提物吸附和解吸试验，得出选择性 高、 吸附速率快、吸附容量大且易于解吸的AB．8型树脂较适宜于总黄酮粗提物的纯化。采 用L25(56)正交组合分析法确定了AB．8纯化总黄酮的最佳工艺参数为：固液比1：14、原液pH h。在此条件下，进行平 值5、吸附时间25h、解吸液浓度70％、解吸液pH值6、解吸时间3 行试验，得出吸附量为17．194-0．16 6．高效液相检测结果：粗提物纯化物水解前的出峰保留时间主要：8．04min，9．78min， 质。同时可以看出，在所用水解条件下柑橘皮渣发酵液粗提纯化物中总黄酮水解并不完全， 其组分的具体结构还有待进一步研究。结合标品谱图及橙皮苷、柚皮芸香苷标准曲标线回归 方程可得柑橘皮渣发酵液精制物中橙皮苷和柚皮芸香苷含量分别为55．91％、12．57％，精制物 中总黄酮含量达68．48％以上。